[发明专利]一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法有效

专利信息
申请号: 201310006174.4 申请日: 2013-01-08
公开(公告)号: CN103088093A 公开(公告)日: 2013-05-08
发明(设计)人: 胡永红;杨文革;江心敏;唐容容;沈飞;朱文俊;冯旌 申请(专利权)人: 南京工业大学
主分类号: C12P21/00 分类号: C12P21/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16;C12R1/085
代理公司: 南京天华专利代理有限责任公司 32218 代理人: 徐冬涛;袁正英
地址: 211816 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明公开了一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法,利用自主筛选鉴定的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus(CGMCC NO.4348),通过微生物发酵培养出蜡样芽孢杆菌发酵液,并利用硫酸铵分级沉淀方法提取出抑菌蛋白粗品;再利用葡聚糖凝胶柱来进一步纯化抑菌蛋白粗品,并将其对真菌病害进行抑菌活性检测。本发明操作方便、工艺简单、成本低廉,可以显著提高其发酵液中抑菌蛋白的抑菌能力。
搜索关键词: 一种 纯化 芽孢 杆菌 发酵 液中抑菌 蛋白 方法
【主权项】:
一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法,其具体步骤如下:(1)抑菌蛋白的提取:利用蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CGMCC No.4348,通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液,并将此发酵液采用硫酸铵分级沉淀以提取获得抑菌蛋白粗品;(2)装柱:称取葡聚糖凝胶用蒸馏水以15‑20mL/g的比例进行装柱前的溶胀3‑5h;将处理好的葡聚糖凝胶用湿法上柱;上柱后用缓冲液进行充分平衡;(3)上样:将步骤(1)中获得的抑菌蛋白粗品配成15‑20mg/ml样品溶液,注入到平衡好的凝胶柱上;(4)洗脱收集:用缓冲液进行洗脱,其中缓冲液的流速为0.5‑1.0mL/min,每2‑5min收集一次洗脱液;将收集的洗脱液分别在波长为280nm下测定其吸光度,保存具有吸收峰的洗脱液,浓缩干燥后得到抑菌蛋白。
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