[发明专利]人口腔鳞癌CAL-27耐药细胞株的培养方法及培养所得的细胞株

摘要

本发明公开了一种人口腔鳞癌CAL-27耐药细胞株的培养方法及所得的细胞株。该方法包括：（1）在细胞培养皿中种植CAL-27亲本细胞，细胞长至贴壁后待融合率达到30～40%时加入筛选药物，初始浓度采用该药物的IC20值，连续作用24～72小时后洗去死细胞并扩增存活的细胞；（2）待细胞重新处于对数生长期时，重复（1）中所述洗去死细胞并扩增存活的细胞的操作，并将筛选药物的浓度提高一倍作用，在筛选药物的浓度提高至第一定值时，降低药物浓度增加倍数，在筛选药物的浓度加至第二定值时，将细胞经过冻存后复苏细胞，即得。所述的耐药细胞株具有临床上的人口腔鳞癌的生物学性状，是研究人口腔鳞癌细胞的耐药机制的理想模型。

主权项

一种人口腔鳞癌CAL‑27耐药细胞株的培养方法，其特征在于，其包括如下步骤： （1）在细胞培养皿中种植人口腔鳞癌CAL‑27亲本细胞，细胞长至贴壁后待融合率达到30～40%时加入筛选药物，初始浓度采用该药物的IC20值，连续作用24～72小时后洗去死细胞并扩增存活的细胞； （2）待细胞重新处于对数生长期时，将细胞重复步骤（1）中所述洗去死细胞并扩增存活的细胞的操作，并将筛选药物的浓度提高一倍进行作用，在筛选药物的浓度提高至第一定值时，降低药物浓度增加倍数，在筛选药物的浓度加至第二定值时，将细胞经过冻存后复苏细胞，即制得人口腔鳞癌CAL‑27耐药细胞株；所述第一定值的判断标准是指到该第一定值的下一个倍增值时，观察到细胞大量死亡，细胞状态变差，所述第二定值的判断标准是细胞在该第二定值的反复作用下能够正常生长，到该第二定值下一个倍增值时细胞增殖不受影响，细胞生长正常。