[发明专利]适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法

摘要

本发明是一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括预处理、裂解、纯化、沉淀、洗涤、溶解，本发明方法操作安全、简便、高通量、成本低，对人体无伤害、无痛苦。提取的基因组DNA纯度高，含量高，片段在23kb以上，完全满足全基因组测序文库构建及一般分子生物学实验操作的要求。

主权项

一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)向0.5‑1ml婴幼儿唾液样品中加入500ul提取缓冲溶液，反复吹打混匀后，8000×g离心5分钟，弃去上清，此步骤重复一次； (2)向步骤(1)得到的沉淀中加入500ul裂解液，彻底悬浮沉淀并充分混匀后，室温放置30分钟，期间来回颠倒离心管数次； (3)向步骤(2)得到的混合液中，加入RNA酶的水溶液10μL，37℃下静置10min； (4)向步骤(3)得到的上清液中，加入等体积苯氛‑氯仿混合溶液，充分混匀，混合液4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内； (5)向步骤(4)得到的上清液中加入等体积苯氛‑氯仿‑异戊醇混合溶液，充分混匀后，4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内； (6)向步骤(5)得到的上清液中加入等体积氯仿‑异戊醇混合溶液，充分混匀后，4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内； (7)向步骤(6)得到的上清液中加入0.6倍体积的冰浴异丙醇溶液及0.1倍的醋酸钠溶液，‑20℃静置60分钟后，4℃，12000×g离心10分钟，弃上清； (8)向步骤(7)得到的沉淀物中加入0.5mL 70％乙醇清洗沉淀物，4℃，12000×g离心5分钟，弃上清，此步骤重复一次； (9)步骤(8)得到的沉淀物自然风干，加入20μL无菌超纯水回溶，电泳检测，‑20℃保存待用。