[发明专利]一种可简易检测自然水样中多种赤潮藻的试剂盒

摘要

本发明公开了一种可简易检测自然水样中多种赤潮藻的试剂盒，包括膜分类基因芯片条，含检测赤潮异湾藻、东海原甲藻、新月菱形藻、共生甲藻、中肋骨条藻、柔弱角毛藻、三叶原甲藻、塔玛亚历山大藻共8种赤潮藻的种特异性探针、阴性对照探针和阳性对照探针，每条探针2个重复；以及核酸制备所需试剂和核酸杂交所需试剂；本试剂盒即是要开发一种便携式、灵敏和快速的检测试剂盒，该试剂盒既能对自然样品中的几种常见赤潮藻，包括赤潮异湾藻、东海原甲藻、新月菱形藻、共生甲藻、中肋骨条藻、柔弱角毛藻、三叶原甲藻、塔玛亚历山大藻进行同时检测，又不需要昂贵的仪器，也即实现对自然样品中多种赤潮藻的现场检测。

主权项

一种可简易检测自然水样中多种赤潮藻的试剂盒，其特征在于，包括膜分类基因芯片条，含检测赤潮异湾藻、东海原甲藻、新月菱形藻、共生甲藻、中肋骨条藻、柔弱角毛藻、三叶原甲藻、塔玛亚历山大藻共8种赤潮藻的种特异性探针、阴性对照探针和阳性对照探针，每条探针2个重复；核酸制备所需试剂：自然样品核酸粗提试剂：2%(m/v)CTAB,0.5%(v/v)β‑mercaptoethanol,1.4M NaCl,20mM EDTA,100mM Tris‑Cl,10U RNase Inhibitor；5×NASBA Buffer：0.2M Tris‑HCl,60mM MgCl2,0.35M KCl2,25mM DTT,20mM dNTP；NTP：10mM ATP,10mM GTP,10mM CTP，6.5mM UTP,3.5mMDigoxigenin‑11‑UTP；5×Primer mix：75%DMSO,1μM NASBA‑P1,1μM NASBA‑P2,25mM DTT,20mM dNTP；4×Enzyme mix：1.5M山梨醇,0.42mg/ml BSA,16U/ml RNase H,6400U/ml T7RNA Polymerase,1280U/ml RT‑M‑MLV，4000U/ml RNA inhibitor；核酸杂交所需试剂：RNA变性剂：1.5M NaCl，0.15M二水柠檬酸三钠，pH7.0,0.15M甲醛；杂交液：1%Blocking Reagent II，0.75M NaCl,0.075M二水柠檬酸三钠，50μg/ml鲑精DNA；Buffer II：1%Blocking Reagent II,0.1M Tris,0.15NaCl,pH7.5；碱性磷酸酶标记的DIG抗体：AP‑抗DIG；20×SSC：3M NaCl，0.3M二水柠檬酸三钠，pH7.0；10×Buffer I：1.0M Tris,1.5M NaCl,pH7.5；10×Buffer III：1.0M Tris,1.0M NaCl,0.5M MgCl2,pH9.5；10%SDS；显色剂：2.81%NBT，2.19%BCIP，70%二甲基甲酰胺。