[发明专利]试管慈姑组织培养快速繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种试管慈姑组织培养快速繁殖的方法，经过外植体的消毒处理、茎尖分化、继代增殖、诱导形成试管慈姑。本发明通过组织培养进行试管慈姑的繁殖，繁殖系数高，繁殖周期短，且整个繁殖过程均在人工控制的条件下进行，不受外界环境影响，可以进行周年生产；试管慈姑因其体积小、重量轻、可以解决慈姑试管苗远程运输和贮存过程中的问题；试管慈姑不带病，解决了慈姑常规用种易带病的问题；试管慈姑的诱导将为球茎膨大机理的研究工作提供一个可操作的简单系统；作为离体休眠器官，还可以进行慈姑种质资源离体室内保存研究，且有利于国际间种质资源的活体交换。本发明为慈姑产业的发展提供了一种快速、方便、有效的繁殖方法。

主权项

一种试管慈姑组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）外植体的消毒处理：选取无病虫危害的慈姑球茎，清洗干净后，切取球茎顶芽为外植体，流水冲洗20～35min，滤干后剥去最外面1～2层鳞片进行消毒处理，先用质量分数为72%硫酸链霉素处理10～30min，再用质量分数为70%乙醇表面消毒20～40s，最后用质量分数为0.1%HgCl2溶液处理2～5min；2）茎尖分化：消毒处理后的慈姑用无菌水冲洗4～5次，剥去2～3层鳞片，切取茎尖接种于启动培养基上，所述启动培养基为1/2MS培养基、添加6‑苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.1～0.5mg/L、质量分数为3.0%的蔗糖和质量分数为0～0.5%的琼脂，pH值为5.8～6.0，培养温度25℃～28℃，光照强度1000～1500 lx，每天光照时间10h，直至长成再生小植株；3）继代增殖：将茎尖诱导的再生小植株转接到增殖培养基中进行继代增殖培养，所述增殖培养基为MS培养基、添加6‑苄氨基嘌呤1.0～3.0 mg/L、萘乙酸0.1～0.3mg/L、质量分数为3.0%的蔗糖和质量分数为0～0.5%的琼脂，pH值为5.8～6.0，培养温度25℃～28℃，光照强度1000～1500 lx，每天光照时间10h，直至萌发形成分株的慈姑试管苗；4）诱导试管慈姑：将慈姑试管苗转接到诱导培养基上，所述诱导培养基为MS培养基、添加6‑苄氨基嘌呤0～3.0mg/L、萘乙酸0～0.3mg/L、活性炭0.5～1.0g/L、质量分数为3.0%～8.0%的蔗糖和质量分数为0～0.5%的琼脂，pH值为5.8～6.0，在培养温度14℃～22℃，每天光照时间0～12h的条件下诱导形成试管慈姑。