[发明专利]一种鉴定七种海参种类的PCR-RFLP方法无效
| 申请号： | 201310025874.8 | 申请日： | 2013-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN103014175A | 公开（公告）日： | 2013-04-03 |
| 发明（设计）人： | 唐庆娟;郑荣;律迎春;王玉明;李兆杰;薛勇;王静凤;薛长湖 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 一种鉴定七种海参种类的PCR-RFLP方法，它的步骤为首先提取海参DNA模板；然后对COⅠ基因的特异性片段进行PCR扩增得到690bp左右的片段；其次对扩增产物进行限制性内切酶酶切；最后对酶切产物进行电泳检测，不同海参得到不同数量和大小的条带；选用的特异性内切酶分别为：加州拟刺参：SSPⅠ；北大西洋瓜参：EcoRⅤ；仿刺参：SSPⅠ，梅花参：EcoRⅤ，海地瓜：ScaⅠ，美国肉参：PvuⅡ，靴参：EcoRⅤ、SSPⅠ。本发明方法克服了传统形态学鉴定方法存在的准确性受多种因素影响、工作量大、耗时长等缺点。采用本发明，只需要一次PCR反应、一次酶切反应和一次聚丙烯凝胶电泳，操作简便，分型时间短，特异性好。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 海参 种类 pcr rflp 方法 | ||
【主权项】：
一种鉴定七种海参种类的PCR‑RFLP方法，其特征在于它的步骤为首先提取海参DNA模板；然后对COⅠ基因的特异性片段进行PCR扩增得到690bp左右的片段；其次对扩增产物用限制性内切酶酶切；最后对酶切产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，不同海参的酶切产物聚丙烯酰胺凝胶电泳后得到不同数量和大小的条带；所述的PCR扩增的引物：COⅠef5’‑ATAATGATAGGAGG[A/G]TTTGG‑3’，COⅠer5’‑GCTCGTGT[A/G]TCTAC[A/G]TCCAT‑3’；所述的七种海参分别为加州拟刺参、北大西洋瓜参、仿刺参、梅花参、海地瓜、美国肉参和靴参；所述的限制性内切酶是SSPⅠ、EcoRⅤ、ScaⅠ和PvuⅡ中的一种、两种、三种或全部四种。
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