[发明专利]一种灰葡萄孢特异性PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种灰葡萄孢特异性PCR检测方法，包括如下步骤：根据RAPD标记获得灰葡萄孢菌特异性片段，设计扩增引物对序列B1SE11f和B1SE11r；提取样品DNA，PCR法扩增；凝胶电泳检测扩增产物，判断样品是否含灰葡萄孢菌；所述判断具体为：若电泳结果在327bp出现单一扩增条带，则说明样品中含有灰葡萄孢菌。本方法可检测到0.4纳克灰葡萄孢菌DNA，可特异性区分葡萄孢属其它种真菌以及其近缘属真菌，且能直接应用于田间检测。采用本发明检测灰葡萄孢菌，检测时间短，成本低，检测结果特异，结果判定简单。

主权项

一种灰葡萄孢特异性PCR检测方法，其步骤为：1）CTAB法提取样品真菌菌丝基因组DNA；2）PCR法扩增，PCR反应体系具体为：样品基因组DNA 1µL；10×PCR buffer 2.5µL；2.5mM dNTP Mixture 0.5µL；5U/µL rTaq酶0.25µL；一对20µM引物分别0.5µL；ddH2O 19.75µL；总体系25µL；PCR反应程序具体为：94℃预变性5min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，27个循环；72℃延伸10min；降温至16℃维持5min；所述引物对为：B1SE11f：5’–CAGGAAACACTTTTGGGGATA–3’；B1SE11r：5’–GAGGGACAAGAAAATCGACTAA–3’ ；3）凝胶电泳检测扩增产物，EB染色观察，在327bp处存在单一扩增条带表明样品中含灰葡萄孢。