[发明专利]一种产S-3-羟基丁酮基因工程菌及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种产S-3-羟基丁酮基因工程菌及其构建方法与应用，该菌株分类命名为paenibacillus polymyxa CGMCC 3044-Bud A-。Bud A为2,3-丁二醇脱氢酶基因，通过同源双交换，敲除P.polymyxa CGMCC 3044中的Bud A基因获得菌株p.polymyxa CGMCC 3044-Bud A-。通过上述方法构建的重组菌能发酵合成光学纯S-3-羟基丁酮，光学纯度可达100%，无3-羟基丁酮还原态副产物2,3-丁二醇，该菌株能直接利用菊芋菊粉、葡萄糖、丁二酮等底物，培养条件粗放，操作方便简单，光学纯度高，生产成本低，有利于大规模产业化生产。

主权项

一种产S‑3‑羟基丁酮基因工程菌，其分类命名为paenibacillus polymyxa CGMCC 3044‑Bud A‑，该工程菌是通过下列方法构建得到：利用PCR技术从多粘类芽孢杆菌paenibacillus polymyxa CGMCC 3044中扩增出2,3‑丁二醇脱氢酶基因Bud A，5’端39bp碱基序列构成同源臂Ⅰ，3’端20bp碱基序列构成同源臂Ⅱ，通过多克隆位点将同源臂Ⅰ和同源臂Ⅱ分别串联到携带λRed同源重组序列克隆粘粒SuperCos‑1/pIJ790的oriT复制起始序列和阿泊拉霉素抗性基因ApraR序列的两端，得到含“Bud A同源臂Ⅰ‑oriT‑ApraR‑Bud A同源臂Ⅱ”序列的重组粘粒SuperCos‑1/pIJ790‑Bud A同源臂Ⅰ‑oriT‑ApraR‑Bud A同源臂Ⅱ，重组粘粒转化paenibacillus polymyxa CGMCC 3044，并在λRed介导下与paenibacillus polymyxa CGMCC 3044发生同源双交换，得到重组的多粘类芽孢杆菌，即产S‑3‑羟基丁酮基因工程菌paenibacillus polymyxa CGMCC 3044‑Bud A‑。