[发明专利]一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨

摘要

本发明公开了一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨，用下述方法获得：以杂交杨（Populus trichocarpa×Populus deltoides）叶片的总RNA为模板，以SEQ ID No.2、3为引物，RT-PCR得到SEQ ID No.1并连接到pJET1.2上得到重组质粒并导入E.coli菌株TOP10，筛选阳性克隆，筛选含有抗性质粒的菌落，提取质粒进行PCR验证、双酶切验证，挑选正确的重组子，命名为pBI121-WIN4并转入根癌农杆菌，进行菌落PCR鉴定；获得的菌株转化欧美杂交杨，得到抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨。本发明的抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨对杨尺蠖害虫的抗虫能力强。

主权项

一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨，其特征是用下述方法获得：（1）以杂交杨（Populus trichocarpa×Populus deltoides）叶片的总RNA为模板，以SEQID No.2、SEQ ID No.3所示核苷酸序列为上、下游引物，通过RT‑PCR得到了SEQ ID No.1表示的核苷酸序列；（2）将凝胶回收的SEQ ID No.1表示的核苷酸序列连接到pJET1.2载体上得到重组质粒并导入E.coli菌株TOP10，筛选出阳性克隆，提取质粒；（3）将步骤（2）获得的质粒双酶切，将凝胶回收的SEQ ID No.1表示的核苷酸序列与经双酶切的植物表达载体pBI121进行连接，转化E.coli菌株TOP10；（4）用SEQ ID No.2、SEQ ID No.3筛选含有抗性质粒的菌落，提取质粒并进行质粒PCR验证、BamHI/SacI双酶切验证，挑选正确的重组子，将其命名为pBI121‑WIN4；（5）将pBI121‑WIN4通过电击法转入根癌农杆菌C58中，得到的菌落进行菌落PCR鉴定，大小为981bp片段的菌落即为正确的菌株；（6）将步骤（5）获得的菌株转化欧美杂交杨（Populus deltoides×Populus nigra），获得一种抗杨尺蠖害虫的转基因欧美杂交杨。