[发明专利]一种动物源性食品中磺胺二甲基嘧啶的检测方法有效

专利信息
申请号: 201310031829.3 申请日: 2013-01-29
公开(公告)号: CN103105387A 公开(公告)日: 2013-05-15
发明(设计)人: 杨黄浩;张晓龙;宋良;柯开美;刘威;田中群 申请(专利权)人: 福州大学
主分类号: G01N21/65 分类号: G01N21/65;G01N1/34;G01N1/40
代理公司: 福州元创专利商标代理有限公司 35100 代理人: 蔡学俊
地址: 350108 福建省福州市*** 国省代码: 福建;35
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摘要: 发明提供了一种动物源性食品中磺胺二甲基嘧啶的检测方法,该检测的步骤为:合成分子印迹材料;实际样品制备;用乙酸乙酯将磺胺二甲基嘧啶从水产品中提取;对提取液进行旋转蒸发;重新溶解于甲醇水溶液;经分子印迹固相萃取柱净化富集;结合壳层隔绝纳米粒子拉曼增强光谱检测磺胺二甲基嘧啶。本方法的积极效果:所合成分子印迹材料特异性强,用于固相萃取柱填料,可以从实际样品中分离富集待测目标分子;结合壳层隔绝纳米粒子进行拉曼增强检测磺胺二甲基嘧啶,检测灵敏度高、速度快、样品用量少、操作方便,可用于动物源性食品中磺胺二甲基嘧啶的快速检测,检测灵敏度可达50ppb。
搜索关键词: 一种 动物 食品 磺胺 甲基 嘧啶 检测 方法
【主权项】:
一种动物源性食品中磺胺二甲基嘧啶的检测方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤: (1)利用本体聚合的方法,合成磺胺二甲基嘧啶的分子印迹材料:在玻璃容器中将模板分子磺胺二甲基嘧啶(SM2)、功能单体甲基丙烯酸(MAA)、交联剂乙二醇二甲基双丙烯酸酯(EGDMA)按照摩尔比例为1:4‑10:20‑50 混合均匀,一起加入到致孔剂中,加入引发剂偶氮二异丁腈(AIBN),超声处理5‑10分钟,通氮气除氧10分钟,密封,置于58‑60℃ 水浴或油浴条件下,热引发聚合反应18‑26小时,得到块状聚合物;将所得块状聚合物,通过研磨,过200目和400目分样筛的,所得聚合物颗粒为35‑75微米范围,用滤纸包裹置于索氏提取反应器,用甲醇‑乙酸(9/1,v/v)混合液提取48‑72小时,再用甲醇溶液提取8‑16小时,颗粒于60℃条件干燥4小时,将干燥颗粒经丙酮沉降出去细小颗粒,所得产物45℃真空干燥8小时,得到磺胺二甲基嘧啶印迹材料;所述甲醇‑乙酸混合液,按体积比计,甲醇:乙酸=9:1;(2)用于分子印迹固相萃取柱的填料:称取步骤(1)合成的磺胺二甲基嘧啶印迹材料填充固相萃取空管,两端用20微米的固相萃取筛板封住,用10 mL 甲醇‑乙酸混合液淋洗分子印迹固相萃取柱,再用10 mL 甲醇淋洗;干燥备用;所述甲醇‑乙酸混合液,按体积比计,甲醇:乙酸=9:1;(3)样品制备:取样品可食用部分,切碎,均质,于‑18℃冷冻储存;(4)样品前处理及磺胺二甲基嘧啶提取:准确称取步骤(3)样品,加入无水硫酸钠、乙酸乙酯,漩涡振荡均质2分钟,4000rpm/min,离心2分钟,收集乙酸乙酯溶液;再用乙酸乙酯重复提取一次,合并乙酸乙酯溶液,30℃温度下减压蒸馏至近干,加入10%甲醇溶解,加入正己烷,漩涡混合2分钟,转至离心管;重复溶解过程,合并混合液于离心管,漩涡2分钟,弃去正己烷,再加入正己烷重复操作一次;加入超纯水,待净化;(5)过分子印迹固相萃取柱净化: 对步骤(2)的分子印迹固相萃取柱,依次用甲醇,超纯水,淋洗活化;将步骤(4)得到的待净化液加入分子印迹固相萃取柱;依次用超纯水和5%甲醇水溶液淋洗,抽干固相萃取柱;用甲醇‑乙酸混合液洗脱固相萃取柱;30℃条件下将洗脱液减压蒸馏至近干,用10%甲醇水溶液溶解定容;所述甲醇‑乙酸混合液,按体积比计,甲醇:乙酸=9:1;(6)标准溶液配制:准确称取磺胺二甲基嘧啶,先用HPLC级甲醇溶解样品,再加超纯水溶解配制成1 mg/mL的标准储备液;由1 mg/mL 的标准储备液加超纯水逐级稀释得到不同梯度标准溶液;(7)表面增强拉曼检测:将壳层隔绝纳米粒子离心浓缩,所得浓缩壳层隔绝纳米粒子为拉曼增强粒子;准确移取步骤(6)配制的磺胺二甲基嘧啶溶液,加入聚集剂,混匀,加入适量浓缩壳层隔绝纳米粒子,混匀,取适量混匀后溶液滴于承载疏水凹槽;用便携式拉曼光谱仪激光聚集,采集拉曼光谱,获得磺胺二甲基嘧啶的表面增强拉曼光谱图;对样品净化后溶液进行拉曼增强检测;(8)对照和定性定量判断:由步骤(7)获得的磺胺二甲基嘧啶的拉曼指纹图谱,对特征峰强度的变化和浓度做线性图,获得浓度与特征峰强度的线性方程;(9)检测实际样品净化浓缩液中磺胺二甲基嘧啶检测:按步骤(7)操作方法检测步骤(4)所得溶液中磺胺二甲基嘧啶的拉曼光谱,把特征峰强度与步骤(8)所得方程进行换算,得到检测溶液中磺胺二甲基嘧啶的浓度,通过换算得到动物源性食品中所含的磺胺二甲基嘧啶浓度,定性定量分析检测磺胺二甲基嘧啶的浓度。
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