[发明专利]一种基于γ-Fe2O3纳米材料免疫磁分离食源性致病菌快速检测方法

摘要

一种基于γ-Fe2O3纳米材料免疫磁分离的食源性致病菌快速检测方法，属于食品安全致病菌快速检测技术领域。本发明依赖于建立的可以用于食品液体样本中致病菌的快速筛选方法，利用γ晶型Fe2O3纳米材料制备的免疫磁珠针对性地富集目标菌株，通过分离捕获了目标菌的纳米磁珠，再硝化反应使之转化为铁离子，检验铁离子从而间接检测出样本中是否含有目标致病菌。在一定条件下铁离子的量与目标菌显示出线性关系，在一定范围能够定量检测目标菌。该方法可以用于食品样本中有害致病菌的快速检测，从而可以作为大批待检样品的快速筛选。

主权项

一种基于γ‑Fe2O3纳米材料免疫磁分离的食源性致病菌快速检测方法，其特征步骤如下：1）检测目标菌的特异性免疫磁珠的制备；2）将目标菌特异性单克隆抗体固定在固相载体上；3）免疫磁珠富集目标菌株并分离：将第1步制得的免疫磁珠加入待检样品，充分混合震荡，抓取目标菌后通过施加外加磁场，则磁珠就汇集到磁场一边，吸走上清液则可以分离出磁珠，若待检样本中有目标菌，则被磁珠所富集，加少量无菌的去离子水则形成目标菌的磁珠悬浊液；4）将富集的磁珠悬浊液加到固定了单克隆抗体的固相载体上，若存在目标菌则形成双抗夹心，用无菌的去离子水清洗，则没有抓取到目标菌的磁珠就被洗掉，若不存在目标菌，则所有磁珠都被洗掉；5）之后，用洗脱剂将固定板上的双抗夹心的磁珠洗下来，用外加磁场分离磁珠的方法分离磁珠，用无菌的去离子水清洗掉离子和溶剂，如果还存在磁珠，这部分就是抓到目标菌的磁珠；6）这部分磁珠，加入分析纯的硝酸和硫酸进行硝化反应，使磁珠Fe2O3转变为三价铁离子和二价铁离子，采用邻二氮菲吸光光度法、硫氰酸钾比色法等可以检测出铁离子的量，从而可以算出磁珠的量，通过加标定量磁珠而在一定程度间接定量出目标菌的量。