[发明专利]一种D-氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白及其制备方法有效
| 申请号： | 201310032712.7 | 申请日： | 2013-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN103103167A | 公开（公告）日： | 2013-05-15 |
| 发明（设计）人： | 鞠建松;徐书景;赵宝华;李辉欣;冯利伟 | 申请（专利权）人： | 河北师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/06 | 分类号： | C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12Q1/26;C12R1/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 石家庄新世纪专利商标事务所有限公司 13100 | 代理人： | 董金国 |
| 地址： | 050024 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种D-氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白及其制备方法。根据同源序列比对结果，通过定点突变技术将原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacterprotophormiae,DSM15035)中D-氨基酸氧化酶的115、119及286三个位点分别突变，构建三点突变表达载体pET-E115A/N119D/T286A，通过原核表达、纯化获得酶蛋白。所获得的突变蛋白对底物D-Met的表观二级速率常数Kcat/Km为1.39×105s-1·M-1，是野生型DAAO的5.03倍，是猪肾来源的pKDAAO蛋白的55.96倍。可以提高对部分D-氨基酸的检测效率，有较好应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 氨基酸 氧化酶 突变体 蛋白 及其 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种D‑氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其中：（1）SEQ ID No.1所示的D‑氨基酸氧化酶的氨基酸序列中第115位的谷氨酸（E）突变为丙氨酸（A）；（2）SEQ ID No.1所示的D‑氨基酸氧化酶的氨基酸序列中第119位的天门冬酰胺（N）突变为天门冬氨酸（D）；（3）SEQ ID No.1所示的D‑氨基酸氧化酶的氨基酸序列中第286位的苏氨酸（T）突变为丙氨酸（A）。
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