[发明专利]一种海胆源多粘芽孢杆菌抗肿瘤活性蛋白的制备方法及其应用

摘要

一种海胆源多粘芽孢杆菌抗肿瘤活性蛋白的制备方法，步骤为：取海胆卵研磨，将研磨液涂布于牛肉膏蛋白胨平板培养基上，37℃恒温培养2天；挑取单菌落反复划线培养至纯菌株；得海胆共生多粘芽孢杆菌DNC2；将DNC2菌株在pH9的牛肉膏蛋白胨液体培养基中35℃发酵1天，牛肉膏蛋白胨液体培养基中牛肉膏和蛋白胨所占的质量百分比分别为3%和6%；4000r/min离心去除菌体，在上清液中加入硫酸铵，硫酸铵的饱和终浓度为60%，4℃静置过夜，10000r/min离心处理30min，将沉淀物用PBS缓冲液溶解后，再用截留分子量为3500道尔顿的透析袋透析4天，得海胆源多粘芽孢杆菌抗肿瘤活性蛋白。本方法操作简单、成本低廉。

主权项

 一种海胆源多粘芽孢杆菌抗肿瘤活性蛋白的制备方法，其特征在于：步骤如下：a. 取健康、新鲜的海胆卵研磨成均浆后，将研磨液均匀涂布于牛肉膏蛋白胨平板培养基上，在37℃恒温条件下培养2天；b. 挑取单菌落反复划线培养至纯菌株；得到海胆共生多粘芽孢杆菌DNC2（Bacillus polymyxa）；该菌株已于2013年1月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号: CGMCC No: 7078；c. 将DNC2菌株在pH9的牛肉膏蛋白胨液体培养基中35℃条件下发酵1 天，所述牛肉膏蛋白胨液体培养基中牛肉膏和蛋白胨所占的质量百分比分别为3%和6%；d．在4000 r/min的条件下离心去除菌体，在上清液中加入硫酸铵，硫酸铵的饱和终浓度为60%，4℃静置过夜，在10000 r/min条件下离心处理30 min，将沉淀物用PBS缓冲液溶解后，再用截留分子量为3500道尔顿的透析袋透析4天，取透析袋中的物质冷冻干燥，得海胆源多粘芽孢杆菌抗肿瘤活性蛋白。