[发明专利]小麦人工小分子RNA表达载体、其构建方法及应用

摘要

本发明提供了一种高效的小麦人工小分子RNA表达载体、其构建方法及应用，其是选择来源于小麦的miR171前体序列作为骨架序列，根据miRNA和miRNA*的配对特点，针对特定靶基因上的适当靶位点设计amiRNA序列，并构建到用于植物转化的表达载体上，使其适合于在小麦中高效表达，以及在小麦复杂的异源六倍体基因组中，针对某个基因的多个同源拷贝，或任何一个基因的某个单拷贝，快速地设计出高效特异的amiRNA，用于调控靶基因的表达水平，这在小麦目标性状改良和候选基因功能验证等方面具有重要价值。

主权项

1.小麦人工小分子RNA，其核苷酸序列为：5’-AAUGGUCACUAUM’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’AGACCACGCCUGCCGGCCGGCCGUAGCCAUGCAUCUGCAUGCGGUGGUGGCUCUCAGUGCUCUUU-3’；其中，M为A、U、G或C，M’为根据天然配对方式与M互补的碱基；序列UMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM与序列M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’A反向互补，且序列UMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM中第4、9和12位的碱基分别与序列M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’M’A中第18、13和10位的碱基形成错配；序列UMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM由小麦靶基因编码，其碱基组成满足G+C含量为55%~58%。