[发明专利]铁皮石斛内生细菌特异性巢氏PCR检测方法及所用引物有效
| 申请号： | 201310043895.2 | 申请日： | 2013-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN103131698A | 公开（公告）日： | 2013-06-05 |
| 发明（设计）人： | 胡秀芳;周晓风;于婕 | 申请（专利权）人： | 浙江理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/38;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种巢式PCR扩增引物，包括第一次PCR扩增引物（fM1、rC5）和第二次PCR扩增引物（GC夹-f515、rC5）。本发明还同时公开了利用上述引物进行的铁皮石斛内生细菌的特异性巢氏PCR快速检测方法，包括如下步骤：1）、铁皮石斛总基因组DNA的提取；2）、特异性巢氏PCR扩增16S rRNA基因的特定片段：第一次PCR扩增时，退火温度为50-54℃；第二次PCR扩增时，退火温度为55-59℃；3）、DGGE分析：将巢氏PCR的第二次扩增产物进行DGGE电泳；4）、内生细菌的种属鉴定：选择清晰的DGGE条带，进行PCR扩增；将扩增片段进行克隆、测序和BLAST比对，确定种属特征。 | ||
| 搜索关键词： | 铁皮 石斛 细菌 特异性 pcr 检测 方法 所用 引物 | ||
【主权项】：
巢式PCR扩增引物，其特征是：包括第一次PCR扩增引物和第二次PCR扩增引物，所述第一次PCR扩增引物为：fM1：5’‑CCGCGTGNRBGAHGAAGGYYYT‑3’，rC5： 5’‑TAATCCTGTTTGCTCCCCAC‑3’；所述第二次PCR扩增引物为：GC夹‑f515：5’‑CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGGT GCCAGCMGCCGCGGTAA‑3’；rC5： 5’‑TAATCCTGTTTGCTCCCCAC‑3’。
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