[发明专利]具有抗紫外辐射功能的小球藻类金属硫蛋白的实验方法

摘要

本发明公开了一种具有抗紫外辐射功能的小球藻类金属硫蛋白的实验方法，它包括小球藻类金属硫蛋白的制备和活体细胞试验等步骤。由于本发明采用普通海洋小球藻(C.vulgaris)为原材料，通过锌诱导制备锌结合类金属硫蛋白。通过NIH/3T3和HaCaT活体细胞模型进行抗紫外辐射试验。发现NIH/3T3和HaCaT细胞经紫外辐射后，细胞活性下降，细胞形态改变甚至出现裂解的现象。而分别在NIH/3T3和HaCaT细胞介质中加入小球藻类金属硫蛋白制品后再经紫外辐射，发现细胞形态变化小，细胞活性得到保持，说明小球藻类金属硫蛋白具有抗紫外辐射功能。

主权项

一种具有抗紫外辐射功能的小球藻类金属硫蛋白的实验方法，其特征在于：它包括以下步骤：（1）活体细胞经0.25%胰酶消化3‑8 min后，加入4 mL含10%胎牛血清的DMEM完全培养液悬浮细胞；（2）在24孔板中各加入0.3 mL细胞悬浮液，于37℃及5% CO2气氛的培养箱中培养24 h；（3）取出24孔板，此时细胞完全贴壁，弃上清液，加入以pH 7.4的PBS为介质的小球藻类金属硫蛋白制品0.3 mL，在距离紫外灯管25 cm处辐射0‑9 J/cm2；（4）弃上清液，加入37℃预热的新鲜DMEM培养基并放入培养箱中培养12 h；（5）弃上清液，往各孔加入2 mg/mL的MTT溶液0.1 mL，继续培养2 h后，加入0.5 mL DMSO溶液，充分溶解后各取0.2 mL溶液放入96孔板中，用酶标仪测定570 nm处的吸光度值；（6）以pH 7.4的PBS溶液 0.3 mL替代小球藻类金属硫蛋白制品进行对照试验，通过比较试验组和对照组的吸光度值说明小球藻类金属硫蛋白的抗紫外辐射能力。