[发明专利]一种提取哺乳动物和鸟类粪便DNA的方法

摘要

本发明公开了一种从哺乳动物和鸟类粪便中提取并纯化总DNA的方法。该方法包括如下步骤：1）前处理：若粪便成形，体积大于等于1×1×1cm3，且表面有粘液层，则以粘液层为待测样品；其余以粪便为待测样品；2）提取：将待测样品置于pH8.0的缓冲液中，混匀后于56-60℃保温8-12min；500g离心5-10min，取上清；除蛋白；进行DNA抽提和DNA沉淀，得到待纯化总DNA；3）纯化：将待纯化总DNA进行琼脂糖凝胶电泳，切下含待纯化总DNA的胶块，加入溶胶液，于65-75℃溶胶，溶胶后样品加入硅胶膜DNA吸附柱内，进行DNA纯化，得到纯化后的总DNA样品。本发明对不同类型粪便进行不同预处理；通过梯度离心使粪渣和肠道脱落细胞有效分离；增加温浴，使脱落细胞更易从粪渣中析出，最大限度提高细胞含量。

主权项

一种从动物粪便中提取并纯化总DNA的方法，包括如下步骤：（1）样品前处理：为如下A）或B）：A）若待测粪便成形，则进行如下A1）或A2）：A1）若所述粪便体积大于等于1×1×1cm3，且所述粪便表面有粘液层，则取所述粘液层作为待测样品；A2）若所述粪便体积小于1×1×1cm3，或所述粪便表面没有粘液层，则将所述粪便用液氮研磨，将研磨后样品作为待测样品；B）若待测粪便不成形，则将所述粪便用液氮研磨，将研磨后样品作为待测样品；（2）从步骤（1）所得待测样品中提取待纯化总DNA：为如下（a）‑（d）：（a）将所述待测样品置于pH8.0的缓冲液中，混匀后于56‑60℃保温8‑12min，得到样品混合液；所述待测样品与所述pH8.0的缓冲液的配比为0.3g：1mL；（b）将步骤（a）得到的样品混合液以500g离心5‑10min，取上清液；（c）除去步骤（b）得到的上清液中的蛋白，得到样品裂解液；（d）对步骤（c）得到的样品裂解液进行DNA抽提和DNA沉淀，得到待纯化总DNA；（3）对步骤（2）得到的待纯化总DNA进行纯化：为如下（I）‑（II）：（I）将步骤（2）得到的待纯化总DNA进行琼脂糖凝胶电泳，切下含有所述待纯化总DNA的胶块，向所述胶块中加入溶胶液，于65‑75℃溶胶，得到待过柱样品液；所述胶块与溶胶液的配比为1mg：3μl；（II）将步骤（I）得到的待过柱样品液加入到硅胶膜DNA吸附柱内，进行DNA纯化，得到纯化后的总DNA样品。