[发明专利]一种尿激酶原基因突变体及其制备方法

摘要

一种尿激酶原基因突变体及其制备方法，它在保持蛋白质的氨基酸组成和序列不变的前提下，在基因序列的5’端增加了两个核苷酸G和T，在序列的3’端增加了核酸内切酶Sal1的识别序列GTCGAC，其基因突变体的核苷酸序列为序列表1；其制备方法包括（1）合成单链核苷酸片段；（2）PCR产生双链DNA片段；（3）拼接尿激酶原基因突变体的全序列；（4）尿激酶原基因突变体序列测定和分析；本发明通过人工合成全基因的方法，不仅优化了全部遗传密码子，而且对基因两端进行了适当修饰，使之易于进行测序分析和构建表达载体等进一步基因操作；从而开发一种适宜在大肠杆菌中表达的新型尿激酶原基因，以便通过大肠杆菌发酵技术生产尿激酶原。

主权项

一种尿激酶原基因突变体，其特征在于在保持蛋白质的氨基酸组成和序列不变的前提下，在基因序列的5’端增加了两个核苷酸G和T，在序列的3’端增加了核酸内切酶Sal1的识别序列GTCGAC，其基因突变体的核苷酸序列为序列表1；突变基因序列包含一系列密码子替换；密码子代换的详细资料如下：第34位亮氨酸的密码子从CTA变为CTT，第64位异亮氨酸的密码子从ATA变为ATC，第79位精氨酸的密码子从CGA变为CGT，第107位组氨酸的密码子从CAC被更换成CAT，第108位精氨酸的密码子从AGA变为CGC，第123位精氨酸的密码子从AGG变为CGC，第128、129、130位连续三个精氨酸的密码子从CGG CGA AGG变换为CGC CGT CGC，第198位和199位两个精氨酸的密码子从AGG AGG 变为CGC CGT,第201位精氨酸的密码子从CGG 变换成CGC，第243位精氨酸的密码子从AGG变为CGT，第273位组氨酸的密码子从CAC变为CAT，第287位精氨酸密码由AGG变为CGC，第293位精氨酸密码子从AGG变为CGT，第295位异亮氨酸的密码子从ATA更换为ATT，第343位精氨酸的密码子从CGG变为CGC，第411位精氨酸的密码子从AGA变换成CGC。