[发明专利]从鸡蛋清中提取卵巨球蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种从鸡蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，该方法包括鸡蛋清溶液的制备、聚乙二醇分离、沉淀溶解与处理、凝胶过滤层析纯化四个步骤。本发明解决了卵巨球蛋白分离纯化操作复杂、周期长、得率低等问题，建立了一种简单、快速和高效的卵巨球蛋白提取方法，所得卵巨球蛋白纯度达到95.98%，在保持高纯度的同时，回收率大幅提高，达到61.4%，该方法整个过程仅需10~12小时即可完成，大大简化了操作，降低了成本，提高了效率。

主权项

一种从鸡蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）鸡蛋清溶液的制备取新鲜鸡蛋，将蛋清和蛋黄分开，收集鸡蛋清，边搅拌边向鸡蛋清中缓缓加入0.6~3倍体积的蒸馏水，加入完成后，继续搅拌2~3h，得鸡蛋清溶液；（2）聚乙二醇分离称取上述鸡蛋清溶液，按质量加入3~5%的聚乙二醇8000，搅拌2~3h，然后在8000~12000转/分的转速下离心8~15min，收集上清液，再向上清液中加入聚乙二醇8000，使聚乙二醇8000在上清液中的质量浓度达到8~10%，搅拌2~3h，然后在8000~12000转/分的转速下离心8~15min，收集沉淀；（3）沉淀溶解与处理将所得沉淀置于含有0.3~0.5M氯化钠的PBS缓冲液中，PBS缓冲液的体积是步骤（1）中的鸡蛋清体积的1/8~1/5，搅拌使沉淀溶解，再离心除去少量不溶物，取上清液待下一步纯化；（4）凝胶过滤层析纯化使用Sephacryl S‑200 HR作为凝胶过滤层析填料，装填后用PBS缓冲液对层析柱进行平衡，将步骤（3）中获得的上清液注入到层析柱中，用PBS缓冲液进行洗脱，收集第一个层析峰，即得卵巨球蛋白。