[发明专利]一种万象组织培养的方法

摘要

本发明涉及一种万象组织培养的方法，包括如下步骤：培养基的配制、外植体的选取与消毒、愈伤诱导、不定芽诱导、不定芽增值、壮苗培养、不定芽生根诱导、组培苗驯化及移栽。基本培养基选用MS培养基，蔗糖用量为20～40g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8～9g/L，培养基pH分装前调整为5.7～5.8；愈伤诱导培养基为MS+6-BA3.0～5.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；不定芽诱导培养基为MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；不定芽增殖培养基为MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；壮苗培养基为MS+6-BA0.1～0.2mg/L+NAA0.01～0.1mg/L；生根培养基为MS+IBA0～1.0mg/L或1/2MS+IBA0～1.0mg/L。本发明的优点：建立的万象组培快繁技术体系增殖系数2～2.5，生根率100％，移栽成活率98％以上。

主权项

一种万象组织培养的方法，其特征在于：该方法包括以下几个步骤：1)外植体的选取及处理：选取万象穗状花序作为起始材料，收集到的万象穗状花序剥去小穗基部萼片，再将整个花序切成0.5cm长短，作为组培用外植体；2）愈伤诱导：在超净工作台上，将经过表面消毒的外植体在转移至无菌接种盘中，用无菌滤纸吸去外植体表面水分，接种于初代培养基MS+6‑BA3.0～5.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L中进行初代培养，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；3）不定芽诱导：将获得的增殖良好的万象愈伤材料转移至诱导培养基MS+6‑BA1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L中，进行不定芽，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；4）不定芽增殖：在无菌工作台上，将愈伤诱导获得的1～1.5cm高的不定芽2～3个一丛，利用无菌的解剖刀将基部轻轻造成一些伤口，接种于不定芽增殖培养基中进行增殖培养，不定芽增殖培养基为MS+6‑BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；5）壮苗培养：高生长到1.5～2cm的丛生不定芽2～3个一丛，接种到壮苗培养基MS+6‑BA0.1～0.2mg/L+NAA0.01～0.1mg/L中培养，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；6）不定芽生根诱导：从基部将高生长到3～5cm的丛生不定芽分开成单个不定芽，接入生根培养基中进行不定根的诱导，生根培养基为MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；7）组培苗驯化及移栽：不定芽基部长出3～5条1～2cm的不定根后，将组培移至温室，散射光培养5d后打开瓶盖，再培养1～2d，完成组培苗移栽前驯化，然后将组培苗从培养瓶取出，洗净组培苗表面琼脂，晾至表皮稍红,，栽入基质中，保湿60％‑80％以上培养15d，然后在温室中正常培养。