[发明专利]一种植物表达载体及其构建方法和应用

摘要

本发明涉及一种植物表达载体及其构建方法和应用。用PCR的方法从出发表达载体pGreenII0229、pCAMBIA3300-35S-HAK和pGH-X6145G上克隆1#、2#、3#和4#片段。用NotI和MIUI分别酶切1#和2#片段并连接得到载体pJWW-12；用XhoI分别酶切pJWW-12和3#片段并连接得到载体pJWW-123；用SacI分别酶切载体pJWW-123和4#片段并连接得到表达载体pJWW0230。本发明可以方便地进行TA克隆。本发明载体可以方便快捷插入启动子和目的基因，启动子可通过简单的TA克隆连接入载体，目的基因可通过一步克隆插入到本载体中，大大简化了操作步骤，降低了成本，提高了工作效率。该载体的发明可为植物基因工程育种提供有力支持，并为转基因植物的安全性评价和商业化种植奠定基础。

主权项

一种植物表达载体，其特征在于按照包括如下步骤的方法得到：出发表达载体为pGreenII0229和pCAMBIA3300‑35S‑HAK，分别用引物从pGreenII0229上克隆两个片段分别为1#和2#片段，分别含有LB和RB；从pCAMBIA3300‑35S‑HAK上克隆35S‑NOS片段为3#片段；以质粒pGH‑X6145G为模板克隆4#片段，最后将这4个片段连接在一起，构建成新的植物表达载体pJWW0230；其中，RB位于从pGreenII0229克隆的1#片段5’端下游，LB位于从pGreenII0229克隆的2#片段中部；所述1#片段如序列SEQ ID NO：1所示；所述2#片段如序列SEQ ID NO：2所示；所述3#片段如序列SEQ ID NO：3所示；所述RB如序列SEQ ID NO：4所示，所述LB如序列SEQ ID NO：5所示；所述凝血酶基因如序列SEQ ID NO：6所示；所述大豆蛋白肽基因如序列SEQ ID NO：7所示；连接4#片段测序结果如序列SEQ ID NO：8所示。