[发明专利]产纤维素酶的突变菌株、高效表达目的蛋白的突变菌株及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201310084844.4 | 申请日： | 2013-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN103305426A | 公开（公告）日： | 2013-09-18 |
| 发明（设计）人： | 田朝光;姜永生;刘倩;马延和 | 申请（专利权）人： | 天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12N9/42;C12N1/15;C12N15/80;C12R1/66;C12R1/885;C12R1/80;C12R1/77;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 鲁兵 |
| 地址： | 300308 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了产纤维素酶的基因工程菌和高效表达目的蛋白的工程菌及其构建方法与应用。本发明通过改造微生物三个β-葡萄糖苷酶基因NCU00130、NCU04952、NCU08755得双基因突变菌株BG13(NCU00130×NCU08755)、BG12(NCU00130×NCU04952)、BG23(NCU04952×NCU08755)和三基因突变菌株BG123(NCU00130×NCU04952×NCU08755)，并将其在发酵过程中添加特定诱导物纤维二糖来生产纤维素酶。此外，本发明还以三基因突变菌株BG123为父本，以组氨酸缺陷型纤维二糖水解酶双突变缺失菌株Δ2cbh::Δhis3为母本经杂交得到六基因突变菌株Δ3βG::Δ2cbh::Δhis3，并利用其生产目的蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 纤维素酶 突变 菌株 高效 表达 目的 蛋白 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
用于生产纤维素酶的双基因突变菌株，其特征在于，能够在纤维二糖诱导条件下表达含纤维二糖水解酶CBH1和CBH2在内的纤维素酶系；为以下菌株之一：a.命名为BG13(NCU00130×NCU08755)的双基因突变菌株，是敲除β‑葡萄糖苷酶基因NCU00130和NCU08755的微生物菌株；b.命名为BG12(NCU00130×NCU04952)，是敲除β‑葡萄糖苷酶基因NCU00130和NCU04952的微生物菌株；c.命名为BG23(NCU04952×NCU08755)，是敲除β‑葡萄糖苷酶基因NCU04952和NCU08755的微生物菌株；所述微生物包括但不限于脉孢菌属（Neurospora）、曲霉属（Aspergillus）、木霉属（Trichoderma）、青霉属（Penicillium）、镰刀霉属（Fusarium）、腐质霉属（humicola）、孢壳霉属（Thielavia）或侧孢霉属（Sporotrichum）；所述β‑葡萄糖苷酶基因的核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸残基序列如下：1）β‑葡萄糖苷酶基因NCU00130的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示；β‑葡萄糖苷酶基因NCU00130编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQ ID NO.2所示；2）β‑葡萄糖苷酶基因NCU04952的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示；β‑葡萄糖苷酶基因NCU04952编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQ ID NO.4所示；3）β‑葡萄糖苷酶基因NCU08755的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.5所示；β‑葡萄糖苷酶基因NCU08755编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQ ID NO.6所示。
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