[发明专利]一种检测抗肿瘤药物抑制肿瘤细胞和血小板粘附的活性的方法

摘要

本发明涉及生物化学领域，公开了一种检测抗肿瘤药物抑制肿瘤细胞和血小板粘附的活性的方法。该方法用荧光标记探针标记血小板，然后分别与未经抗肿瘤药物处理的肿瘤细胞和经抗肿瘤药物处理的肿瘤细胞孵育，于流式细胞仪上采用FL1通道检测肿瘤细胞荧光率获得对照组荧光率和药物处理组荧光率，将两者进行显著性差异分析获得检测结果。本发明采用悬浮状态的肿瘤细胞和未活化的血小板进行检测，符合真实的肿瘤细胞与血小板粘附过程，在粘附实验前通过细胞计数调整细胞密度保证加药处理的细胞与对照组细胞密度一致，且通过流式分析软件设定检测细胞数目，保证不同预处理组检测的细胞数目一致，避免不同预处理对肿瘤细胞数目的影响，结果更加准确。

主权项

一种检测抗肿瘤药物抑制肿瘤细胞和血小板粘附的活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将荧光标记探针与富血小板血浆孵育，然后离心并吸取底层的血小板沉淀用血小板洗涤液洗涤，然后用血小板悬浮液重悬洗涤后的血小板，接着向血小板重悬液中加入CaCl2，然后调整血小板浓度为10‑100×106个/mL以及CaCl2浓度为1mM备用；步骤2、将未经待检测抗肿瘤药物处理的肿瘤细胞设为对照组，经待检测的抗肿瘤药物处理后的肿瘤细胞为药物处理组，两组细胞分别经胰酶消化处理后用PBS洗涤，然后用肿瘤细胞悬浮液重悬得到对照组肿瘤细胞重悬液和药物处理组肿瘤细胞重悬液，调整两组肿瘤细胞密度为5×106个/mL备用；步骤3、将步骤2得到的两组肿瘤细胞重悬液分别和步骤1得到的血小板重悬液孵育，用多聚甲醛固定后于流式细胞仪上采用FL1通道检测肿瘤细胞荧光率获得药物处理组荧光率以及对照组荧光率；将药物处理组荧光率和对照组荧光率进行统计学显著性差异分析得到检测结果。