[发明专利]一种苹果属植物叶片全蛋白提取方法无效
| 申请号： | 201310089139.3 | 申请日： | 2013-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN103275170A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 张彩霞;丛佩华;张利义;康国栋;田义;王强;杨玲 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院果树研究所 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14 |
| 代理公司： | 沈阳晨创科技专利代理有限责任公司 21001 | 代理人： | 任玉龙 |
| 地址： | 125100 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 一种苹果属植物叶片全蛋白提取方法，具体为：采摘幼嫩叶片，无菌水清洗后快速风干，准确称取2克，用液氮在研钵中迅速研磨成精细粉末；加入4ml的匀浆缓冲液，4℃下涡旋振荡10分钟；匀浆液中加入等体积的Tris-饱和酚，涡旋摇荡20分钟；将匀浆液转入离心管中，4℃下15000×g，离心30分钟，上层酚相转移新离心管；回收酚相，加入5倍体积0.1M甲醇醋酸铵溶液，-20℃条件下沉淀4小时以上；沉淀物经冷丙酮漂洗三次，室温风干，得到蛋白干粉，-80℃条件下保存备用。本发明的优点：以田间苹果幼嫩叶片为研究试材，其总蛋白提取纯度高，方法简单。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 苹果 植物 叶片 蛋白 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种苹果属植物叶片全蛋白提取方法，其特征在于：所述的苹果属植物叶片全蛋白提取方法，具体为：采摘叶龄为20～25天的幼嫩叶片，无菌水清洗后快速风干，用锋利刀片去除叶片叶柄部分，准确称取2克，用液氮在研钵中迅速研磨成精细粉末，粒径约为40‑60微米，研磨时间3分钟；加入4ml的匀浆缓冲液，4℃下涡旋振荡10分钟；匀浆液中加入等体积的Tris‑饱和酚，具体为三羟甲基氨基甲烷缓冲液配制的pH 8.0的苯酚溶液，4℃下，涡旋摇荡20分钟；将匀浆液转入离心管中，4℃下15000×g，离心30分钟，上层酚相转移新离心管；重新加入同体积的上述匀浆缓冲液,4℃下涡旋震荡10分钟，15000×g离心10分钟；继续回收酚相，加入5倍体积0.1M甲醇醋酸铵溶液，‑20℃条件下沉淀4小时以上；溶液在4℃下，15 000×g，离心10分钟，沉淀物经冷丙酮（含20mM二硫苏糖醇）漂洗三次，室温风干，得到蛋白干粉，‑80℃条件下保存备用。
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