[发明专利]以抗生素为碳源生长的土壤微生物的分离方法

摘要

本发明公开了一种以抗生素为碳源生长的土壤微生物的分离方法，包括以下步骤：1）制备含有(NH4)2SO4 、MgSO4.7H2O、EDTA等成分的液态单一碳源介质；2）、利用液态单一碳源介质制备液体抗性培养基、固体抗性培养基；3）、用液体抗性培养基将菌悬液稀释至菌悬液的体积浓度为0.1%的土壤稀释液；4）、在超菌台上，将土壤稀释液涂布在固体抗性培养基上；然后室温静止5~10 min；接着，将固体抗性培养基倒置于恒温培养箱29~31℃下培养，直至固体抗性培养基表面长出菌落，再通过平板划线得到纯培养物，纯培养物为土壤细菌。采用本发明的方法分离土壤微生物具有操作简便、分离效果好等特点。

主权项

以抗生素为碳源生长的土壤微生物的分离方法，其特征在于包括以下步骤：1）、制备单一碳源介质：溶解5 g (NH4)2SO4, 3 g KH2PO4, 0.5 g MgSO4.7H2O, 15 mg EDTA, 4.5 mg ZnSO4.7H2O, 4.5 mg CaCl2.2H2O, 3 mg FeSO4.7H2O, 1 mg MnCl2.4H2O, 1 mg H3BO3, 0.4 mg Na2MoO4.2H2O, 0.3 mg CuSO4. 5H2O, 0.3 mg CoCl2.6H2O 和 0.1 mg KI至900ml蒸馏水中，用0.1mol/L NaOH溶液调pH至6.2~6.4，再用蒸馏水定容至1000ml；得液态单一碳源介质；2）、制备液体抗性培养基和固体抗性培养基：在液态单一碳源介质中加入青霉素直至青霉素的浓度为0.8~1.2g/L，过0.22μm滤膜；得液体抗性培养基；在500mL的液态单一碳源介质中加入7.5克琼脂后灭菌，冷却至40~50℃后，加入经过0.22μm滤膜的青霉素溶液直至所得的液态物中青霉素的浓度为0.8~1.2g/L；所得的液态物冷却后，得固体抗性培养基；3）、制备土壤稀释液：称1g土壤放入盛有49 mL磷酸盐缓冲液的容器中，在摇床上振荡20~40min；得菌悬液；用液体抗性培养基将菌悬液稀释至菌悬液的体积浓度为0.1%的土壤稀释液；以上操作在超菌台中完成；4）、倒置培养：在超菌台上，将土壤稀释液涂布在固体抗性培养基上；然后室温静止5~10 min；接着，将固体抗性培养基倒置于恒温培养箱29~31℃下培养，直至固体抗性培养基表面长出菌落，再通过平板划线得到纯培养物，所述纯培养物为土壤细菌。