[发明专利]一种东海乌参酶溶性胶原蛋白的提取纯化方法

摘要

本发明提供了一种东海乌参酶溶性胶原蛋白的提取纯化方法，所述方法包括：取洁净块状东海乌参样品先用EDTA溶液浸泡，再进行匀浆均质，接着依次用Tris-HCl溶液、NaOH溶液、胃蛋白酶乙酸溶液提取，再进行盐析、透析，得到所述酶溶性胶原蛋白；采用EDTA螯合剂去除海参组织中高污染浓度的化学元素，脱除效率达到90%以上，胃蛋白酶水解胶原纤维后的胶原蛋白产物有效的去除了化学键内、键间的交联效应，能够最大限度的提取溶解胶原蛋白，经过氯化钠盐析、透析等纯化步骤，提取得到的胶原蛋白产物纯度达到90%以上，产率为56.99%～61.52%（干重），占东海乌参蛋白中总胶原蛋白含量的97.1%～102.5%，实现了高产率提取东海乌参中胶原蛋白含量。

主权项

一种东海乌参酶溶性胶原蛋白的提取纯化方法，所述方法包括：（1）取洁净块状东海乌参用0.2M、pH8.0的EDTA溶液浸泡5～6天，每天更换EDTA溶液；（2）水洗后，加入冰块，用不锈钢匀浆机进行匀浆均质后，离心取沉淀物进行下一步操作；（3）步骤（2）沉淀加入10～20倍体积的0.1M、pH8.0的Tris‑HCl溶液，搅拌2～4天，充分溶解组织蛋白，离心后取沉淀物进行下一步操作；（4）步骤（3）沉淀加入10～20倍体积的0.1M NaOH搅拌2～4天，每天更换NaOH溶液，离心、取沉淀再加入10～20倍体积的0.1M NaOH搅拌24h，离心、取沉淀用水洗至中性，离心取沉淀物进行下一步操作；（5）步骤（4）所得沉淀加入足量含300w～800w U/L胃蛋白酶的0.5M乙酸溶液提取2～4天，离心得到上清液1，沉淀物再次加入足量含300w～800w U/L胃蛋白酶的0.5M乙酸溶液提取24h，离心得到上清液2；（6）合并上清液1和上清液2，加入4M NaCl至NaCl终浓度为0.8M，盐析，静置1～2h后，离心、取沉淀物；（7）步骤（6）所得沉淀物加入9～10倍体积的0.5M乙酸溶液溶解，用截留分子量7000Da的透析膜进行透析，先用0.02M、pH8.0的Na2HPO4溶液透析48h，换0.1M乙酸溶液透析48h，再换去离子水透析48h，产物冻干，即为所述酶溶性胶原蛋白；上述步骤（1）～（7）均在4℃下进行。