[发明专利]一种富油微藻的高通量筛选方法

摘要

一种富油微藻的高通量筛选方法，它涉及微藻生物能源领域。本发明要解决现有微藻有机溶剂提取法存在耗时费力、所需试剂和样品量大、毒性试剂会对人体和环境造成危害，难以满足微藻筛选中高通量测定油脂含量的需要的问题。本发明的方法如下：一、取微藻富集培养，培养7～14天；二、重复2～3次；三、接种后，培养7～14天；四、进行稀释后涂布，培养至出现藻落；五、挑取生长较快、较大的单藻落，培养7～14天；六、重复步骤四至步骤五3～4次；八、超声波进行破碎后加入尼罗红溶液，选择荧光强度最高的藻株，即得到高油脂含量的藻株；本发明避免了冗繁的传统油脂检测步骤，克服了藻种大规模筛选缺乏快速、高通量筛选方法的瓶颈问题。

主权项

一种富油微藻的高通量筛选方法，其特征在于富油微藻的高通量筛选方法是通过以下步骤实现：一、取微藻样品加入到培养基A中富集培养15～30天，得藻液；二、取步骤一得到的藻液，按体积百分含量为10%的接种量接种于培养基A中，在温度为25℃的光照培养箱中培养7～14天；三、重复步骤二2～3次，得藻液A；四、取步骤三得到的藻液A，按体积百分含量为10%的接种量接种于培养基B中，在温度为25℃的培养箱中培养7～14天，得藻液B；五、取步骤四得到的藻液B以无菌水按10‑1、10‑2、10‑3、10‑4、10‑5和10‑6的倍数进行稀释，将10‑5～10‑6倍数稀释后的藻液均匀涂布于固体培养基C平板上，在25℃培养箱中培养至出现藻落；六、在无菌环境中，挑取单藻落，转入到培养基B中，在温度为25℃的培养箱中培养7～14天；七、重复步骤五至步骤六3～4次，即完成藻株的分离，得到微藻液；八、取3～10mL步骤七得到的微藻液，用超声波进行破碎，在破碎后的藻液中加入尼罗红溶液，混匀后，测定藻液的荧光强度，选择荧光强度最高的藻株，即得到高油脂含量的藻株；其中，步骤一和步骤二中所述的培养基A按重量份数是由0.1～1.5份硝酸钠、0.018～0.09份硫酸镁、0.02～0.08份磷酸氢二钾、0.009～0.054份氯化钙、0.01～0.06份碳酸钠、0.003～0.012份柠檬酸、0.003～0.012份柠檬酸铁铵、0.0005～0.01份乙二胺四乙酸和0.005～0.01份微量元素组成的；步骤四和步骤六中所述的培养基B按重量份数是由0.1～1.5份硝酸钠、0.018～0.09份硫酸镁、0.02～0.08份磷酸氢二钾、0.009～0.054份氯化钙、0.01～0.06份碳酸钠、0.003～0.012份柠檬酸、0.003～0.012份柠檬酸铁铵、0.0005～0.01份乙二胺四乙酸、0.005～0.01份微量元素和5～50份葡萄糖组成的；步骤五中所述的固体培养基C按重量份数是由0.1～1.5份硝酸钠、0.018～0.09份硫酸镁、0.02～0.08份磷酸氢二钾、0.009～0.054份氯化钙、0.01～0.06份碳酸钠、0.003～0.012份柠檬酸、0.003～0.012份柠檬酸铁铵、0.0005～0.01份乙二胺四乙酸、0.005～0.01份微量元素、5～50份葡萄糖和5～20份琼脂组成的；步骤八中所述的藻液与尼罗红溶液的体积比为3:1000。