[发明专利]人脑钠肽的中和性基因工程抗体3C1及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201310100086.0 | 申请日： | 2013-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN104073502A | 公开（公告）日： | 2014-10-01 |
| 发明（设计）人： | 张巍;唐健 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/13 | 分类号： | C12N15/13;C12N15/70;C07K16/26;A61K39/395;A61P25/00 |
| 代理公司： | 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257 | 代理人： | 董红曼 |
| 地址： | 200062 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人源化抗人脑钠肽中和性基因工程抗体3C1制备方法，包括：将噬菌体粒基因3C1用NocI和NotI双酶切后插入到pET22b质粒构建成重组质粒pET22b-3C1；转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS得到基因工程菌pET22b-3C1/BL21(DE3)pLysS；经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达、纯化，复性后得到重组目的蛋白3C1。本发明还公开了人脑钠肽的中和性基因工程抗体3C1在制备脑性盐耗综合征等颅脑疾病的药物中的应用。本发明人脑钠肽的中和性基因工程抗体3C1的制备方法具有快速、成本低、人源化等优点，且适合工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 人脑 中和 基因工程 抗体 c1 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种人脑钠肽的中和性基因工程抗体3C1的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a)将特异性识别脑钠肽的噬菌体粒基因3C1用NocI和NotI双酶切后插入到pET22b质粒中，构建成重组质粒pET22b‑3C1；将所述重组质粒pET22b‑3C1转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，得到基因工程菌pET22b‑3C1/BL21(DE3)pLysS；b)将所述基因工程菌pET22b‑3C1/BL21(DE3)pLysS涂板，挑取单克隆菌至2YT培养基中，37℃培养过夜，按1∶100比例转接后继续培养至OD600nm≈0.4，加1mM异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷诱导4个小时；离心收集菌体，超声破菌，获得包涵体后洗涤、溶解，取上清过Ni‑NTA亲和柱，纯化产物进行复性处理，获得重组目的蛋白3C1。
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