[发明专利]一种多功能克隆载体及其使用方法有效
| 申请号： | 201310102710.0 | 申请日： | 2013-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN103757039A | 公开（公告）日： | 2014-04-30 |
| 发明（设计）人： | 张茂雷;何东海;郝晓燕;康涛 | 申请（专利权）人： | 广州赛哲生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/64 |
| 代理公司： | 广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙) 44295 | 代理人： | 马丽丽 |
| 地址： | 510000 广东省广州市海珠区国际生物岛*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种多功能克隆载体，其构建方法是利用一种抗性基因表达自救方式直接用常规抗生素筛选阳性克隆子，包括以下步骤：首先设计一对具有5’端磷酸化引物序列，接着以PUC19质粒为模版，使用高保真酶PCR扩增得到多功能载体。使用本方法为得到的载体可以高效克隆各种PCR产物，对平末端PCR产物及普通Taq酶扩增产物也有高效克隆效率，可以完全替代平末端克隆载体和TA克隆T载体。使用该方法制备多功能克隆载体，一般阳性率大于90%，有假阳性率低，实验成本低，实验操作环节少，方便快捷的优点。本发明还公开了此种多功能克隆载体的使用方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 多功能 克隆 载体 及其 使用方法 | ||
【主权项】：
一种多功能克隆载体,其特征在于：其构建方法如下，（1）设计一对具有5'端磷酸化引物序列如下:F:5'‑CTGTCAGACCAAGTTTACTCATA‑3'R:5'‑TACCAATGCTTAATCAGTGAGGC‑3'所述引物5'端的第一个碱基为A或者G；（2）PCR扩增以PUC19质粒为模板，使用高保真酶PCR扩增得到足量的产物，然后用DpnI内切酶消化掉残留的模板质粒，胶纯化得到的产物即为多功能克隆载体。
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