[发明专利]表达多肽的方法

摘要

本发明公开了一种表达多肽的方法。其中，多肽具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，表达多肽的方法包括：利用重组杆状病毒表达毒种，感染第一昆虫Sf9细胞，以便使得第一昆虫Sf9细胞表达多肽，其中重组杆状病毒表达毒种包含编码多肽的核酸分子；以及裂解第一昆虫Sf9细胞，并纯化获得多肽。利用本发明的表达多肽的方法，可以有效地表达多肽，进一步可以得到高产量、高纯度的FMRP蛋白。

主权项

一种表达多肽的方法，所述多肽具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，其特征在于，所述方法包括：利用重组杆状病毒表达毒种感染第一昆虫Sf9细胞，以便使得所述第一昆虫Sf9细胞表达所述多肽，其中，所述重组杆状病毒表达毒种包含编码所述多肽的核酸分子；以及裂解所述第一昆虫Sf9细胞，并纯化获得所述多肽，其中，所述重组杆状病毒表达毒种的供体质粒为pFastBac1，利用重组杆状病毒表达毒种感染第一昆虫Sf9细胞是通过向包含所述第一昆虫Sf9细胞悬液中加入所述重组杆状病毒表达毒种，并于28℃下以170rpm的转速悬浮培养96小时后裂解所述第一昆虫Sf9细胞而完成的，所述第一昆虫Sf9细胞悬液的密度为2×10⁶个细胞/ml，每15毫升2×10⁶个细胞/ml的第一昆虫Sf9细胞悬液中加入1.6ml所述重组杆状病毒表达毒种，其中，所述重组杆状病毒表达毒种是通过下列步骤获得的：利用编码所述多肽的杆状病毒质粒转染第二昆虫Sf9细胞，在转染72小时后，裂解所述第二昆虫Sf9细胞，以便获得病毒原种P1；在六孔板的每孔加入1×10⁶个细胞/ml的第三昆虫Sf9细胞悬液2ml，孵育1h，镜下观察确定细胞贴壁，向每孔中各加入200μl所述病毒原种P1，28℃培养，感染48‑72小时后，每孔收集2ml含病毒的上清培养基，500g离心5min，弃碎片收上清，以便获得P2病毒；在25cm²培养瓶中加入1×10⁶个细胞/ml的第四昆虫Sf9细胞悬液8ml，孵育1h，再向所述25cm²培养瓶中加入80μl所述P2病毒，28℃培养，感染72小时后，将含有病毒的培养基在500g下离心5min，弃碎片收上清，以便获得P3病毒；以及在75cm²培养瓶中加入1×10⁶个细胞/ml的第五昆虫Sf9细胞悬液20ml，孵育1h，再向所述75cm²培养瓶中加入300μl所述P3病毒，28℃培养，感染72h后，将含有病毒的培养基在500g下离心5min，弃碎片收上清，以便获得150ml所述重组杆状病毒表达毒种，其中，在制备所述重组杆状病毒表达毒种的各步骤中加入的病毒量是按如下公式计算的：病毒体积＝[MOI×细胞数]/病毒滴度；其中，所述病毒滴度为病毒滴度经验值，所述病毒滴度经验值P1为1×10⁶‑1×10⁷pfu/ml，P2为1×10⁷‑1×10⁸pfu/ml。