[发明专利]霉菌发酵生物合成制备霉菌氧化物的工艺及所用新型氮源

摘要

本发明公开了一种甾体激素类药物霉菌发酵合成制备霉菌氧化物的工艺及所需新型氮源，配合新型氮源，在27±3℃搅拌反应，并在生物发酵过程中进行通气，经24-72h氧化反应，再经板框压滤脱水、吹干，将底物沃氏氧化物转化为含有霉菌氧化物的菌丝体，再经丙酮提取得到霉菌氧化物粗品，经甲苯、氯仿混合溶剂精制得到霉菌氧化物精品，新型氮源的配方更加适合生物发酵工艺要求，收率可达92%以上，产品质量稳定，产量高、转化率、收率相关指标高，经济效益可观，适合于产业化生产。

主权项

一种霉菌发酵生物合成制备霉菌氧化物的工艺，其特征在于：它包括以下步骤：（1）菌丝制备：A、将碳源：葡萄糖60～85kg；氮源：玉米浆40～57kg；蚕蛹粉10～20kg；硫酸铵5～10kg；新型氮源，新型氮源各组分在培养基中的终浓度设置为：蛋白胨：5‰，酵母浸膏：1‰，(NH4)2SO4 ：0.5‰，FeSO4·7H2O：0.01g‰，NaCl：0.1‰，KH2PO4 ：1‰，MgSO4·7H2O： 0.2‰，吐温80 1%；消沫剂：聚醚1000～2000mL一次投入到一级发酵罐内，加入1～4吨水，调整pH值至2～5，蒸汽灭菌，降温至27±3℃时，接入黑根霉的孢子悬浮液3～50升，孢子悬浮液浓度为10～300万/mL,通入空气，所说的通入空气和反应液的体积比为0.21～0.28倍体积/min，搅拌12～36h,后移入二级发酵罐；B、按与一级发酵罐同样的物料配比投5～10倍物料，经灭菌，降温至27±3℃，移入A步骤所制全部液体，通入空气，所说的通入空气和反应液的体积比为0.21～0.28倍体积/min，搅拌18～36h，投入340kg底物沃氏氧化物，于25～30℃进行生物氧化，氧化反应时间为24～72小时，取样镜检，及色谱测试，底物转化比例达到50～60%后，提高温度至30～60℃，下口罐放料；C、将菌丝液体压入板框压混机，滤掉发酵液，将菌转体空气吹干，再将菌转体粉碎；（2）霉菌氧化物粗品的制备：将粉碎后的菌丝体投入提取罐内，加入菌丝体重量5～10倍丙酮，提取2～8次，将提取液浓缩结晶，得霉菌氧化物粗品；（3）霉菌氧化物精制：将霉菌氧化物粗品投入精制罐内，加入霉菌氧化物粗品重量10～15倍体积的甲苯、氯仿混合溶媒，全溶浓缩，所说的甲苯、氯仿体积比为：1∶2～2∶1，反复精制3～9次，取样测试，霉菌氧化物含量大于97%后，下口罐放料、滤干，精品入烤箱干燥，取样送检，霉菌氧化物含量大于97%为霉菌氧化物。