[发明专利]创伤弧菌和哈氏弧菌快速检测方法

摘要

本发明提供了一种创伤弧菌和哈氏弧菌快速检测方法，目的是为了有利于控制创伤弧菌和哈氏弧菌在海水养殖动物中传播与爆发，采用了现代先进双重聚合酶链反应技术，设计创伤弧菌和哈氏弧菌特异性引物V1和H1，通过特异性地扩增相应细菌DNA片段，然后检测特异性DNA片段，从而达到快速、准确、便捷的检测创伤弧菌的哈氏弧菌的目的。本发明具有特异性强、敏感性高，省时、省力、快速和高效等优点，使原来病原菌诊断时间由原来的3-7天缩短到3-4小时,提高细菌诊断的时效性，本方法可用于海产品及水产养殖动物创伤弧菌和哈氏弧菌的检测或病害监测，为两种弧菌快速诊断提供科学依据，提高病害防治能力。

主权项

一种创伤弧菌和哈氏弧菌快速检测方法，其特征是其中包括两种特异性引物和细菌的特异基因序列的扩增程序；其中两种特异性引物为：创伤弧菌特异引物V，上游序列：5`‑AACAGTGTGGTGCGAACTTAG‑3`,下游序列：5`‑ GGTTACTTGAACATTACGACC‑3`； 哈氏弧菌特异引物H：上游序列：5`‑TCAAGCGATCTCTACACTGC‑3`,下游序列5`‑TGTGGTAGCTTCAGCAAATTG‑3`；细菌的特异基因序列的扩增程序：置于PCR仪上进行DNR扩增，95℃预变性8min，95℃变性35s，64℃退火30s、72℃延伸45s，32个循环，72℃温育10min，‑4℃保存5m‑2h。