[发明专利]一种艾塞那肽的制备方法

摘要

本发明涉及一种艾塞那肽的制备方法。该方法以氨基树脂为原料，先将氨基树脂脱保护，再用逐一偶联的方式依次连接有Fmoc保护的氨基酸，获得侧链全保护基的艾塞那肽[3-39]肽-树脂，再用同样的方法偶联R1-His(R2)-Gly-OH完成His-Gly两个氨基酸片段的连接。本发明方法用于大规模工业化制备艾塞那肽，产品纯度大于99.0%，艾塞那肽[D-His1]杂质、艾塞那肽[Des Gly2]杂质均小于0.1%。

主权项

1.一种艾塞那肽的制备方法，包括步骤如下：（1）以氨基树脂为原料，加入脱保护剂，脱除所述氨基树脂上的Fmoc保护基；（2）将步骤（1）脱除Fmoc保护基的氨基树脂采用逐一偶联的方式依次连接Fmoc保护的氨基酸，所述的偶联是在活化助剂和缩合剂存在下进行的固相偶联反应，以茚三酮检测阴性为反应终点，反应完毕用脱保护剂脱除Fmoc保护基，再与下一个Fmoc保护的氨基酸进行固相偶联反应；重复操作直至合成得到侧链全保护艾塞那肽[3-39]肽-树脂：Fmoc-Glu(O^tBu)-Gly-Thr(^tBu)-Phe-Thr(^tBu)-Ser(^tBu)-Asp(O^tBu)-Leu-Ser(^tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(O^tBu)-Glu(O^tBu)-Glu(O^tBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(O^tBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(^tBu)-Ser(^tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(^tBu)-树脂；所述的各Fmoc保护的氨基酸的用量与氨基树脂的用量的摩尔比为2～5:1；（3）将步骤（2）制备的侧链全保护的艾塞那肽[3-39]肽-树脂与R₁-His(R₂)-Gly-OH二肽片段在活化助剂和缩合剂存在下进行固相偶联反应，接入[1-2]肽组氨酸和甘氨酸（His-Gly），得到侧链全保护艾塞那肽-树脂：R₁-His(R₂)-Gly-Glu(O^tBu)-Gly-Thr(^tBu)-Phe-Thr(^tBu)-Ser(^tBu)-Asp(O^tBu)-Leu-Ser(^tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(O^tBu)-Glu(O^tBu)-Glu(O^tBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(O^tBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Pro-Ser(^tBu)-Ser(^tBu)-Gly-Ala-Pro-Pr o-Pro-Ser(^tBu)-树脂，其中，R₁-His(R₂)-Gly对应的结构为：R₁、R₂为侧链保护基团，各自独立的选自Fmoc、Boc、Trt；当侧链保护基团R₁和/或R₂为Fmoc时，所得侧链全保护艾塞那肽-树脂用脱保护剂脱除Fmoc保护基，再进行下一步骤；（4）上述步骤（3）制备的侧链全保护艾塞那肽-树脂经酸解剂裂解除去树脂和保护基团，经沉淀，得到艾塞那肽粗品。