[发明专利]孕马血清促性腺激素的提纯方法有效
申请号: | 201310114408.7 | 申请日: | 2013-03-17 |
公开(公告)号: | CN103275206A | 公开(公告)日: | 2013-09-04 |
发明(设计)人: | 刘永祥;刘永存 | 申请(专利权)人: | 赤峰博恩药业有限公司 |
主分类号: | C07K14/575 | 分类号: | C07K14/575;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/34 |
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地址: | 024045 内蒙*** | 国省代码: | 内蒙古;15 |
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摘要: | 本发明公开了一种孕马血清促性腺激素的提纯方法,它包括偏磷酸沉淀、乙醇清洗、辛酸沉淀、盐析沉淀、透析除盐、低浓度乙醇沉淀、高浓度乙醇沉淀和透析清洗八个工艺步骤。它增加了辛酸沉淀步骤将偏磷酸难沉淀的白蛋白和其它大分子杂蛋白沉淀出去,盐析沉淀步骤中增加了硫酸铵加入浓度,避免了白蛋白被析出的问题,同时由于增加了硫酸铵加入浓度,提高了孕马血清促性腺激素活性物质析出比例,尤其能够提高促卵泡素(FSH)活性物质的析出比例,在提高了孕马血清促性腺激素纯度的同时,还提高了回收率。 | ||
搜索关键词: | 血清 促性腺激素 提纯 方法 | ||
【主权项】:
一种孕马血清促性腺激素的提纯方法,包括以下步骤:(1)偏磷酸沉淀:在孕马血清中加入偏磷酸,过滤收集沉淀物和上清液;(2)乙醇清洗:在步骤(1)收集的沉淀物中加入与沉淀物等重量的无水乙醇,搅拌、过滤收集乙醇清洗液,弃沉淀;(3)辛酸沉淀:在步骤(1)收集的上清液中加入辛酸,搅拌、离心、过滤收集上清液,弃沉淀;(4)盐析沉淀:将步骤(2)收集的乙醇清洗液和将步骤(3)收集的上清液合并,在20~22℃的温度下,按照1000毫升液体加600~700克硫酸铵的比例加入硫酸铵,充分搅拌溶解,过滤收集沉淀,弃上清液;(5)透析除盐:将步骤(4)收集的沉淀物包于透析袋内,流水透析除去硫酸铵,收集透析袋内的保留液;(6)低浓度乙醇沉淀:在步骤(5)收集的保留液中加入乙醇浓度至42~46%,搅拌、过滤收集上清液,弃沉淀;(7)高浓度乙醇沉淀:在步骤(6)收集的上清液中补充加入乙醇浓度至74~76%,搅拌、离心、过滤收集沉淀,弃上清液;(8)透析清洗:将步骤(7)收集的沉淀物包于透析袋内,流水透析清洗,收集透析袋内的保留液,得到高纯度的孕马血清促性腺激素(PMSG)液体制品。
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