[发明专利]一种具有纤维素和木聚糖催化活性的双功能酶无效
| 申请号： | 201310117705.7 | 申请日： | 2013-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN103243082A | 公开（公告）日： | 2013-08-14 |
| 发明（设计）人： | 李文均;张峰;杨心意;杨玲玲;明红;周恩民;唐蜀昆 | 申请（专利权）人： | 云南大学 |
| 主分类号： | C12N9/70 | 分类号： | C12N9/70;C12N9/42;C12R1/01 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司 53115 | 代理人： | 杨宏珍 |
| 地址： | 650091*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种具有纤维素和木聚糖催化活性的双功能酶，属于生物技术领域。本发明经过如下方法得到：以保藏号：KCTC 12378BP的耐盐高温双歧菌（Thermobifida halotolerans）YIM 90462T为出发菌株，根据ThXyn 11A 以及ThCel9A的基因序列，利用primer 5.0 分别设计一对含有酶切位点的PCR引物，分别扩增出ThXyn 11A片段及GH9-CBM3片段；然后再分别构建pET28a/ThXyn 11A及pET28a/ThCel9A-ThXyn 11A，最后将重组质粒pET28a/ThCel9A-ThXyn 11A转入到大肠杆菌表达宿主BL21中；通过刚果红染色验证双功能酶已经分泌并表达。从构建的工程菌发酵液中分离并纯化出的双功能酶对纤维素的最适反应温度为50 ℃，最适反应pH值为8.0，而对木聚糖的最适的反应温度为70 ℃，最适反应pH值为8.0。在碱性条件下能保持较高的活力，在制浆和造纸、食品、医药、能源、饲料工业中将具有广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 具有 纤维素 聚糖 催化 活性 功能 | ||
【主权项】：
一种具有纤维素和木聚糖催化活性的双功能酶，其特征在于该双功能酶经如下构建方法得到：a. 以保藏号：KCTC 12378BP的耐盐高温双歧菌YIM 90462T为出发菌株，根据ThXyn 11A 以及ThCel9A的基因序列，利用primer 5.0 分别设计一对含有酶切位点的PCR引物，分别扩增出ThXyn 11A片段及GH9‑CBM3片段；其中：ThXyn11A片段扩增的PCR引物为：TX11F：CAGAAGCTTGCCGTGACCTCCAACCAG TX11R：CAACTCGAGGTTCGCGCTGCAGGAG ；GH9‑CBM3片段扩增的PCR引物为： G9C3F：GACGCATATGATGCCAGCCTCTGATCCCG9C3R：TTCAAGCTTCGGCGGGGTCCGGTCCT ；b. 分别构建pET28a/ThXyn 11A及pET28a/ThCel9A‑ThXyn 11A，最后将重组质粒pET28a/ThCel9A‑ThXyn 11A转入到大肠杆菌表达宿主BL21中；c. 通过刚果红染色验证双功能酶已经分泌并表达；d. 经过小量发酵从构建的工程菌发酵液中分离并纯化出的双功能酶对纤维素的最适反应温度为50 ℃，最适反应pH值为8.0，而对木聚糖的最适的反应温度为70 ℃，最适反应pH值为8.0。
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