[发明专利]一种优秀冰雪运动员富集cDNA文库及其构建方法

摘要

本发明涉及优秀冰雪运动员富集cDNA文库以及其构建方法，其中利用优秀冰雪运动员血液样品作为材料，通过提取总RNA、合成双链cDNA、蛋白酶K消化、Sfi1酶切并连接入载体、λ噬菌体的包装，最终获得高滴度、高重组率、插入片段范围大的高质量优秀冰雪运动员富集cDNA文库。此发明属于体育科学、人类资源方法学、细胞生物学及分子生物学的交叉学科领域。

主权项

一种优秀冰雪运动员血液富集cDNA文库构建方法：1)此方法的创新点：在于滴度高，重组率高，插入片段范围大。要求的cDNA文库，其滴度高于10⁷pfu/ml，最优选高于10¹⁰pfu/ml；cDNA文库重组率高于90％，优选高于95％；其插入片段范围在0.1kb‑5.0kb之间，最优选在0.3kb‑2.0kb之间。2)此方法的主要实验步骤：(1)取不同个体优秀冰雪运动员新鲜血液；(2)提取总RNA；(3)混合多个个体总RNA；(4)合成双链cDNA；(5)蛋白酶K消化；(6)Sfi1酶切并连接入载体；(7)λ噬菌体的包装。