[发明专利]T细胞快速增殖方法无效
申请号: | 201310125663.1 | 申请日: | 2013-04-12 |
公开(公告)号: | CN103184193A | 公开(公告)日: | 2013-07-03 |
发明(设计)人: | 阳小卫 | 申请(专利权)人: | 阳小卫 |
主分类号: | C12N5/0783 | 分类号: | C12N5/0783 |
代理公司: | 南通市永通专利事务所 32100 | 代理人: | 葛雷 |
地址: | 226000 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种T细胞快速增殖方法,包括配包被液、将抗凝血离心沉降、自体血浆制备、制备重悬分离淋巴细胞、培养等步骤。本发明能快速提高T淋巴细胞体外增殖能力,2周左右T细胞数量扩增1000倍以上,达到百亿至千亿数量级,满足过继性免疫治疗的需要。较现有的T细胞扩增方法强10-50倍。体外培养1周时,该方法与传统方法差别不明显,但10天后该方法显著优于传统培养方法10倍以上。 | ||
搜索关键词: | 细胞 快速 增殖 方法 | ||
【主权项】:
一种T细胞快速增殖方法,其特征是:包括下列步骤:(1)配包被液:50ml离心管中加入D‑PBS20ml,无菌细胞培养级超纯水溶解的纤维连接蛋白1‑5μg共,混匀;将包被液加入T175培养瓶,平放,混匀,铝箔纸包好避光,4℃放置过夜; (2)将50ml抗凝血加到离心管,离心沉降,室温,上层为血浆层,下层为红细胞;(3)自体血浆制备:收集离心的上层血浆层,56 ℃灭活,然后在4℃放置15分钟,最后900g×30min离心除去絮状沉淀,收集上清到另一支新的50ml离心管备用;(4)加入D‑PBS到离心的下层红细胞层中至50ml,混匀后平均加入已经分别添加20ml淋巴分离液的两个离心管,800g×15min离心;收获分离所得的淋巴细胞层细胞于另一支50ml离心管中,用RPMI1640加满到50ml,混匀,洗涤两次;离心洗涤后,使用负压器吸掉上清液,用40ml培养液重悬分离所得的淋巴细胞;(6)将重悬的淋巴细胞悬液加入到洗涤过的T175培养瓶,加入含1%自体血浆的无血清T细胞培养液200ml,置于饱和湿度、37℃、 5.0% CO2培养10‑15天。
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