[发明专利]利用内含肽系统大肠杆菌表达乳铁蛋白改良肽LF-6的方法无效
| 申请号： | 201310126494.3 | 申请日： | 2013-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN103205435A | 公开（公告）日： | 2013-07-17 |
| 发明（设计）人： | 汪以真;张海文;韩菲菲;栾超 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/70;C07K7/08;C07K1/20;C07K1/16 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用内含肽系统大肠杆菌表达乳铁蛋白改良肽LF-6的方法。步骤如下：a、PCR扩增具大肠杆菌密码子偏好性的改良肽LF-6目的基因；b、利用pTWIN1载体和改良肽LF-6目的基因构建改良抗菌肽LF-6的重组表达质粒及相应的克隆菌株；c、鉴定阳性转化子，亚克隆至大肠杆菌表达菌株；d、挑单克隆阳性大肠杆菌表达菌株接种至摇瓶，诱导表达后收集菌液，超声破碎离心获得含融合蛋白的上清；e、对含融合蛋白的上清进行在柱纯化与LF-6的切割释放及进一步通过RP-HPLC分析制备与质谱鉴定；f、对纯化所得抗菌肽LF-6进行抑菌活性验证。本发明利用内含肽融合表达系统在大肠杆菌中成功重组表达猪乳铁蛋白改良肽LF-6，实现了在柱纯化与无酶切割释放，简单易行成本低。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 内含 系统 大肠杆菌 表达 铁蛋白 改良 lf 方法 | ||
【主权项】：
一种利用内含肽系统大肠杆菌表达乳铁蛋白改良肽LF‑6的方法，其特征在于，步骤如下：a、PCR扩增具大肠杆菌密码子偏好性的改良肽LF‑6目的基因；b、利用pTWIN1载体和改良肽LF‑6目的基因构建改良抗菌肽LF‑6的重组表达质粒及相应的克隆菌株；c、鉴定阳性转化子，亚克隆至大肠杆菌表达菌株；d、挑单克隆阳性大肠杆菌表达菌株接种至摇瓶，诱导表达后收集菌液，超声破碎离心获得含融合蛋白的上清；e、对含融合蛋白的上清进行在柱纯化与LF‑6的切割释放及进一步通过RP‑HPLC分析制备与质谱鉴定；f、对纯化所得抗菌肽LF‑6进行抑菌活性验证。
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