[发明专利]检测离体鼠胫骨钙的激光共聚焦同步应力加载方法及装置

摘要

本发明公开了一种检测离体鼠胫骨钙的激光共聚焦同步应力加载方法及装置，其特征在于，将鼠胫骨固定于一个腔室中的组织固定器中间，腔室内充以细胞培养液，一个激光共聚焦显微镜镜头通过腔室下面的石英晶片，每5秒进行一次面扫描，将胫骨前内侧平坦区域的钙在显微镜中成像；组织固定器的一端固定，另外一端施以动态、周期的应力加载方式作用于鼠胫骨产生轴向的压缩载荷，使胫骨前内侧的钙成像表面同时产生轴向的压缩形变和垂直于轴向的弯曲形变。本发明能够显著抑制周期载荷作用引起的激光共聚焦显微镜焦点偏移，使精确的采集和测量应力诱发的原位骨细胞钙信号响应成为可能，从而有利于揭示骨力学信号转导、骨适应及骨质酥松症发生的相关机理。

主权项

一种检测离体鼠胫骨钙的激光共聚焦同步应力加载方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）将标记有Fluo‑8AM钙荧光探针的鼠胫骨固定于一个腔室中的组织固定器中间，腔室内填充以37℃细胞培养液淹没该鼠胫骨，将一个激光共聚焦显微镜镜头对着于腔室下面的石英晶片，使胫骨前内侧平坦区域的钙离子在激光共聚焦显微镜中成像，组织固定器的一端固定，另外一端施以应力加载作用于鼠胫骨产生轴向的压缩载荷，使胫骨前内侧的钙成像表面同时产生轴向的压缩形变和垂直于轴向的弯曲形变；（2）激光扫描共焦显微镜每5秒进行一次面扫描，共进行180帧的图像扫描，其中前5帧的采样作为基线控制；（3）应力加载开始于第5帧和第6帧扫描的间歇，采用周期动态加载方式，基本波形为斜坡加载，包括2‑N的预加载，0.5秒的斜坡上升以及0.5秒的斜坡下降，通过控制加载的速率分别产生斜坡尖峰为8‑N的加载波形，两个加载周期之间的滞留时间为4秒，共加载175周期。