[发明专利]肠道病毒71型感染性克隆及其构建方法和应用无效
| 申请号： | 201310133964.9 | 申请日： | 2013-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN103194475A | 公开（公告）日： | 2013-07-10 |
| 发明（设计）人： | 罗敏;张仁利;卢智刚;冼慧霞 | 申请（专利权）人： | 深圳市疾病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/70;C12N1/21;A61K48/00;A61P31/14;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 黄培智 |
| 地址： | 518000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种肠道病毒71型感染性克隆及其构建方法和应用。肠道病毒71型感染性克隆是以从肠道病毒71型毒株SZ2010-EV71提取的RNA为模板，经RT-PCR扩增得到全基因组序列，再与载体连接，酶切筛选阳性克隆而获得的。本发明仅用了一对引物，就扩增构建成功了感染性克隆，大大简化了EV71的反向遗传学操作步骤；获得的感染性克隆及其序列信息，为EV71的致病机理研究提供了一个有效的平台，可进行多个重要毒株或新毒株的全基因组序列获得及病毒特性分析，同时为EV71的抗病毒药物筛选平台的建立及疫苗的评估提供了重要基础。 | ||
| 搜索关键词： | 肠道病毒 71 感染性 克隆 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种肠道病毒71型感染性克隆的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、以从肠道病毒71型毒株SZ2010‑EV71提取的RNA为模板，SEQ ID NO:2为引物，反转录得到cDNA；所述SZ2010‑EV71的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；(2)、以步骤(1)得到的cDNA为模板，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2为引物，PCR扩增得到肠道病毒71型的全基因组序列；(3)、将步骤(2)得到的肠道病毒71型的全基因组序列与载体连接，酶切，筛选得到阳性克隆，即为肠道病毒71型的感染性克隆。
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