[发明专利]等位基因变体检测方法、试剂盒及组合物

摘要

本发明提供利用阻滞子进行等位基因变体特异性检测的方法、试剂盒及组合物，所述方法包括向核酸样品中加入引物对及杂交过程中3’端不能被聚合酶延伸的阻滞子，所述引物对包括特异性引物及反向引物；所述特异性引物及反向引物分别与所述核酸样品中的靶序列突变型寡核苷酸杂交并产生扩增子；所述阻滞子与核酸样品中的靶序列野生型寡核苷酸杂交；利用所述荧光染料或所述检测指针对所述突变型等位基因进行实时特异检测。增加的阻滞子由于在扩增过程中无法延伸，抑制了野生型等位基因变体的扩增，因而提高了突变型等位基因变体的扩增效率，提高了检测的灵敏度和特异性。

主权项

一种等位基因变体检测方法，其特征在于，包括以下步骤：向核酸样品中加入突变型等位基因的特异性引物及其反向引物以及在杂交过程中3’端不能被聚合酶延伸的阻滞子，并加入荧光染料或检测指针，所述核酸样品中包含靶序列的突变型寡核苷酸及靶序列的野生型寡核苷酸，所述突变型靶核苷酸包含所述突变型等位基因，所述阻滞子与所述野生型寡核苷酸序列互补，所述野生型寡核苷酸包含野生型等位基因，所述突变型等位基因与所述野生型等位基因具有相同的基因座；所述靶序列的野生型寡核苷酸与所述阻滞子杂交，所述突变型寡核苷酸与所述突变型等位基因的特异性引物及所述反向引物杂交并经扩增产生突变型扩增子；利用所述荧光染料或所述检测指针对所述突变型等位基因进行实时特异检测。