[发明专利]绣线菊内生真菌的抗植物病原菌发酵液的制备方法

摘要

本发明涉及绣线菊内生真菌的抗植物病原菌发酵液的制备方法，所述绣线菊内生真菌命名为链格孢XXB07，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2013年3月08日，保藏编号为CGMCCNo.7292。该方法包括以下操作步骤：1.菌株活化，2.种子培养，3.发酵培养，得到绣线菊内生真菌发酵液，该发酵液在无菌条件下过滤除去菌丝体，过0.22微米过滤器，即得到绣线菊内生真菌的抗菌发酵液。本发明明确了具有抗菌活性的链格孢XXB07菌株的抗菌发酵液的制备方法，通过对链格孢XXB07抗菌发酵液的抗菌试验，发现该菌发酵液洗脱物和菌丝体提取物对辣椒疫霉植物病原真菌具有抑制菌丝生长作用。

主权项

绣线菊内生真菌的抗植物病原菌发酵液的制备方法，其特征在于：所述绣线菊内生真菌命名为链格孢菌XXB07（Alternaria sp. XXB07），保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2013年3月08日，保藏编号为CGMCC No.7292；具体发酵制备操作步骤如下：（1）菌种活化     在无菌条件下，将绣线菊内生真菌的菌种，转接于马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基平板中，恒温培养5天，培养温度28℃±1℃，得到活化菌种；（2）种子培养用无菌打孔器将活化菌种打成直径为6mm菌碟，接种5块菌碟于含有50ml液体培养基内，恒温摇床培养2天，摇床转速160转/分，温度28℃±2℃，得摇床种子； （3）发酵培养将摇床种子接种到装有50ml液体培养基中，接种量5%，摇床转速160转/分，温度28℃±2℃，培养7天，得到绣线菊内生真菌发酵液；过滤除去菌丝体，过0.22微米过滤器，即得到绣线菊内生真菌的抗菌发酵液；发酵培养特征：培养第1天，菌体为少量灰色的细丝；培养第3天，灰色的细丝减少，出现黑色的小菌丝球；培养第5天，黑色菌丝球继续增多，并且体积变大，发酵液为灰黑色；培养第7天，出现大量黑色的菌丝球，体积也变大，发酵液为黑色；所述马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基：马铃薯 200克、葡萄糖20克、琼脂20克、蒸馏水1升； 所述液体培养基：蛋白胨15克、葡萄糖 20克、氯化钙 0.5克、磷酸二氢钾0.1克、硫酸亚铁  0.01克、硝酸钠1克和蒸馏水1升，pH=6.0。