[发明专利]一种以胚芽鞘节作为外植体的玉米再生体系的建立方法

摘要

本发明涉及一种以胚芽鞘节作为外植体的玉米再生体系的建立方法，属于农业生物技术和作物育种领域。主要包括以下步骤：（1）将灭菌的玉米种子置于发芽培养基中培养，萌发获得幼苗；（2）从幼苗上切取胚芽鞘节诱导愈伤组织；（3）对愈伤组织进行继代扩繁；（4）对愈伤组织进行胚状体诱导；（5）对胚状体进行分化成苗。本方法取材不受季节限制、扩繁效率高，可应用于玉米大规模遗传转化和单倍体材料的扩繁。

主权项

一种以胚芽鞘节为外植体的玉米再生方法，包括以下步骤：1）将灭菌的玉米种子置于发芽培养基中培养，萌发获得幼苗；2）从上述步骤1）中得到的幼苗上切取胚芽鞘节，接种于愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织并继代培养；3）将上述步骤2）中得到的愈伤组织置于胚状体诱导培养基中，得到玉米愈伤组织胚状体；4）将上述步骤3）中得到的愈伤组织胚状体置于再生培养基中，得到再生苗；5）将上述步骤4）中得到的再生苗置于生根培养基中，获得具有3‑4条根的玉米再生植株；上述发芽培养基是MS＋麦芽糖40g/L＋酶水解酪蛋白0.1g/L＋谷氨酰胺0.5g/L＋2‑吗啉乙磺酸2g/L＋MgCl2•6H2O 1.6g/L＋抗坏血酸 0.1g/L＋6‑BA 3mg/L＋毒莠定0.01g/L；愈伤诱导培养基是MS＋蔗糖 30g/L＋维生素B10.5mg/L＋酶水解酪蛋白 0.5g/L＋脯氨酸 1.5g/L＋硝酸银 5mg/L＋2,4‑D 1.5‑5mg/L＋毒莠定 0‑0.001mg/L；胚状体诱导培养基是MS＋蔗糖 30g/L＋脯氨酸 0.7g/L＋6‑BA 2mg/L；再生培养基是MS＋蔗糖 20g/L＋肌醇 0.1g/L。