[发明专利]一种蔗糖异构酶的制备方法

摘要

本发明涉及一种细胞壁融合蔗糖异构酶的制备方法，其特点是采用超声波破碎技术，制备含有蔗糖异构酶活性的细胞壁融合酶作为催化剂，将蔗糖转化为异麦芽酮糖。包括以下步骤：1）将蔗糖异构酶生产菌在种子培养基中进行菌种活化；2）将活化菌种转种至发酵培养基中培养，进行蔗糖异构酶生产；3）超声波破碎蔗糖异构酶生产菌并收集破碎细胞，获得细胞壁融合蔗糖异构酶。采用本发明制备的蔗糖异构酶催化蔗糖转化时，蔗糖转化率为99.8wt%，转化产物中的异麦芽酮糖比例为88.39%，海藻酮糖为11.61%。

主权项

 一种蔗糖异构酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：第一步：蔗糖异构酶生产将甘蔗克雷伯菌（Klebsiella sugarcanna）CCTCC M 2013153保存斜面接种到种子培养基中，在30°C、150转/分钟条件下，振荡培养至种子培养液的菌体浓度达到OD值0.8~1.0时，按3～5％接种量，接种到150～200 mL发酵培养基中，在30°C、150转/分钟条件下，振荡培养10～12小时，当发酵液中的酶活力达到最大值并稳定后，停止培养；第二步：菌体收集在4°C、10000 ´ g条件下，将发酵培养液离心20～30分钟，弃去上清液，菌体细胞用25～30%原体积的蒸馏水洗涤3～4次，悬浮于25～30%原体积的20 mM磷酸‑柠檬酸缓冲溶液（pH7.0）中，制成菌悬液；第三步：细胞融合蔗糖异构酶制备将20~25 mL菌悬液转移到50 mL大塑料试管内并置于冰水浴中，采用超声波破碎后，于4°C、10000 ´ g条件下，离心15～20分钟，收集破碎后的菌体，用20 mM磷酸‑柠檬酸缓冲溶液（pH7.0）洗涤3～4次；悬浮于等体积的20 mM磷酸‑柠檬酸缓冲溶液（pH7.0），制成细胞融合蔗糖异构酶。