[发明专利]纳豆激酶的提纯方法及制备方法有效
| 申请号： | 201310149128.X | 申请日： | 2013-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN103589706A | 公开（公告）日： | 2014-02-19 |
| 发明（设计）人： | 马义福;胡永刚;徐凤彩;邵玉珠 | 申请（专利权）人： | 珠海市御品堂生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/54 | 分类号： | C12N9/54;C12R1/07 |
| 代理公司： | 广东秉德律师事务所 44291 | 代理人： | 杨焕军;田学东 |
| 地址： | 519000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及纳豆激酶的提纯方法及制备方法，其中，纳豆激酶的提纯方法包括以下步骤：1）提取，2）超过滤，3）葡聚糖凝胶G-50柱层析，4）Amberlite IRC-50阳离子交换柱层析，5）DEAE-CelluloseDE-52阴离子交换柱层析，6）纳豆激酶酶蛋白结晶。纳豆激酶的提纯方法具有纯化度高及回收率高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 激酶 提纯 方法 制备 | ||
【主权项】：
一种纳豆激酶的提纯方法，包括以下步骤：1）提取：将纳豆菌发酵液或粗纳豆激酶溶液进行2000r/min离心，收集上清液，得粗酶液；2）超过滤：将所述粗酶液进行超过滤，收集排阻相对分子质量为10000以上的物质，得超滤浓缩液；3）葡聚糖凝胶G‑50柱层析：用pH值为7.5、浓度为0.1mol/L的磷酸钠缓冲液平衡并装柱，取所述超滤浓缩液上样，用pH值为7.5、浓度为0.1mol/L的磷酸钠缓冲液洗脱；收集洗脱液，合并含酶的洗脱液，并浓缩至原体积的1/3，得第一浓缩液；4）Amberlite IRC‑50阳离子交换柱层析：装柱，取所述第一浓缩液上样，用pH值为6.0、浓度为1/15mol/L的磷酸钠缓冲液与pH值为8.0、浓度为0.2mol/L的磷酸钠缓冲液进行线性梯度洗脱；收集洗脱液，合并含酶的洗脱液，用pH值为7.5、浓度为0.1mol/L的磷酸钠缓冲液透析，浓缩至原体积的1/3，得第二浓缩液；5）DEAE‑CelluloseDE‑52阴离子交换柱层析：装柱，取所述第二浓缩液上样，用pH值为6.0、浓度为1/15mol/L的磷酸钠缓冲液与pH值为pH8.0、浓度为0.2mol/L的磷酸钠缓冲液进行线性梯度洗脱；收集洗脱液，合并含酶的洗脱液，用pH值为7.5、浓度为0.1mol/L磷酸钠缓冲液透析，浓缩至原体积的1/3，得第三浓缩液；6）将所述第三浓缩液装在无盖培养皿中，放置在4℃下，直至出现结晶，取结晶在干燥器中进行干燥，收集结晶粉末，得纳豆激酶酶蛋白结晶。
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