[发明专利]快速检测转玉米PEPC基因作物的ELISA试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种快速检测转玉米PEPC基因作物的ELISA试剂盒及其应用,属于农业科学技术领域。利用玉米PEPC蛋白的特异性单克隆抗体和多克隆抗体研制了快速检测玉米PEPC蛋白的试剂盒及检测方法，以该方法建立的玉米PEPC蛋白的ELISA试剂盒的形式提供，具有使用方便、操作简单、检测快速灵敏、结果准确可靠等特点。该试剂盒可在实验室条件下快速检测出玉米PEPC蛋白是否存在，可以应用于转玉米PEPC基因植物（如水稻，小麦，烟草等）中PEPC蛋白的定性分析；该试剂盒在-20℃下保存12个月后仍然有效。

主权项

一种用于快速检测玉米PEPC基因表达蛋白的ELISA试剂盒，包括：1） 96孔酶标板：包被玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因PEPC蛋白多克隆抗体的酶标板，包被浓度1：1600‑1：3200；2） 玉米PEPC蛋白单克隆抗体：保藏号是CCTCC NO：C2012199，鼠杂交瘤细胞4E5制备的单克隆抗体；3） 酶标二抗：辣根过氧化物酶HRP标记的羊抗鼠IgG，工作效价1：5000‑1：10000；4） 阴性对照品：未转玉米PEPC基因的水稻蛋白提取液；5） 样品处理液：50mmol·L‑1 Tris‑HCL，pH7.5，1mmol·L‑1 MgCl2，5mmol·L‑1二硫苏糖醇DTT，质量比2%聚乙烯吡咯烷酮PVP，质量比10%甘油；6） 稀释液为磷酸盐缓冲液PBS 0.01M，pH7.5；7） 洗涤液为磷酸盐吐温缓冲液PBST：1000mL 0.01M PBS中加0.5mL Tween‑20；8） 底物溶液：底物缓冲液: Na2HPO4·12H2O  0.2g；NaH2PO4·2H2O 6.84g，双蒸水500 mL；4℃保存备用；TMB母液：TMB 40mg； DMSO 5mL；避光4℃保存备用；双蒸水配制的体积比1% H2O2。