[发明专利]基于16S rDNA的细菌核酸指纹特征谱的制备方法及其用途有效
| 申请号： | 201310161704.2 | 申请日： | 2013-05-03 |
| 公开（公告）号： | CN103361418A | 公开（公告）日： | 2013-10-23 |
| 发明（设计）人： | 张学记;马庆伟;赵洪斌;张海燕;赵艳梅 | 申请（专利权）人： | 向华 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 410128 湖南省长沙市*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于细菌16S rDNA核酸指纹图谱制备的方法，包括PCR扩增、SAP酶消化、转录和核酸酶切、纯化、质谱仪检测等步骤。基于该方法，建立常见细菌的核酸指纹图谱数据库。根据实验产生的质谱峰图，可对待检细菌进行分类与鉴定，结果可广泛运用于细菌分类和鉴定、遗传进化分析、耐药筛选用途以及进出口检验等领域。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 16 rdna 细菌 核酸 指纹 特征 制备 方法 及其 用途 | ||
【主权项】：
一种基于细菌16S DNA的核酸指纹图谱制备方法。其特征在于，它至少包括如下步骤：（1）PCR反应：使用针对细菌16S rDNA的PCR通用引物，分别扩增多个细菌的核酸模板，得到含扩增目标区域的PCR产物；（2）SAP酶消化：用碱性磷酸酶（SAP酶）处理步骤（1）得到的PCR产物；（3）转录和核酸酶切：使用特定的转录和内切酶，分别在一个反应体系中，对步骤（2）得到的各个细菌的消化产物进行转录和核酸酶切，获得一系列长度不一、丰度不一的核酸片段；（4）纯化：使用树脂处理步骤（3）得到的酶切产物；（5）质谱仪检测：将步骤（4）得到的纯化产物上点在含有基质的靶片上，上质谱仪进行检测，得到不同细菌的特征核酸指纹谱图。
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