[发明专利]一种快速获取鹅OAZ2基因全长CDS序列及快速检测其表达规律的方法在审
申请号: | 201310165304.9 | 申请日: | 2013-04-18 |
公开(公告)号: | CN103740696A | 公开(公告)日: | 2014-04-23 |
发明(设计)人: | 康波;姜冬梅;白林;马容;何珲;邹明峰 | 申请(专利权)人: | 四川农业大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/68 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 611130 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | 一种快速获取鹅OAZ2基因全长CDS序列及快速检测其表达规律的方法,包括以下步骤:提取鹅卵巢组织中的总RNA,然后将总RNA反转录为cDNA;分别以鸟类OAZ2和β-actin基因的保守区作为模板,设计OAZ2基因的全长CDS序列引物(OAZ2-L),快速检测OAZ2基因表达规律的OAZ2和β-actin荧光定量特异性引物;通过RT-PCR扩增反应,PCR产物的回收纯化,DH5a感受态细胞的制备,目的基因的连接、转化,阳性菌落的筛选,菌液测序获取全长OAZ2基因全长CDS序列,并测序鉴定所设计的荧光定量引物能特异性的扩增OAZ2和β-actin基因;然后再利用荧光定量PCR进一步鉴定,鉴定结果表明所建立的方法能快速、准确地检测鹅机体中OAZ2基因的表达规律。 | ||
搜索关键词: | 一种 快速 获取 oaz2 基因 全长 cds 序列 检测 表达 规律 方法 | ||
【主权项】:
一种快速获取鹅OAZ2基因全长CDS序列及快速检测其表达规律的方法包括以下步骤:1)取鹅卵巢组织中的总RNA,并将总RNA反转录为cDNA;2)设计OAZ2‑L基因的引物,长度为750bp;Forward:AGGATGATAAACACCCAGGACAGTAReverse:AGGCAACACGTTTCAATGAGATAGT设计OAZ2‑S基因的引物,长度为142bp;Forward:AAGCCTCATGTTGTCCACTTCReverse:GTGCTGATAACCCTTCTTTGC设计β‑actin基因的引物,长度为222bp;Forward:GCGGCATGCCACACCGTGCCCATCTATGAGReverse:GCGAAGCTTGGCCATCTCCTGCTCGAAGT3)通过RT‑PCR扩增反应,PCR产物的回收、纯化,DH5α感受态细胞的制备,目的基因的连接、转化、阳性菌落的筛选、菌液测序获取全长OAZ2序列。4)利用SYBR‑Green染料法,并应用实时荧光定量PCR技术构建OAZ2和β‑actin荧光定量PCR引物的标准曲线和溶解曲线,进一步鉴定所设计的OAZ2和β‑actin荧光定量引物的特异性和准确性。
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