[发明专利]利用柿木屑栽培金顶侧耳的方法

摘要

本发明涉及到一种利用林业废弃物柿木屑为主料栽培培养金顶侧耳的方法，包括适宜分解柿木屑的金顶侧耳菌株选育过程，属于农林残余物利用及食药用真菌的栽培技术领域。本发明通过如下步骤实现：A、筛选具有柿木屑分解优势的金顶侧耳菌株;B、菌种扩繁；C、金顶侧耳菌栽培。本发明由于在金顶侧耳紫外诱变育种初筛步骤中用柿木屑粉末作为唯一碳源能够诱导筛选出更有效利用柿木屑的菌株，从而提高分解菌株选育效率；在液体菌种制备过程中，柿木屑作为特定底物，因诱导作用产生相应的酶，又会缩短菌株在柿木屑为主料的培养基上的适应时间，提高其发菌速度，进而提供了一种通过选育适宜利用柿木屑的金顶侧耳菌株进行高效利用农林废弃物柿木屑的技术方案。

主权项

一种利用柿木屑栽培金顶侧耳的方法，其特征包括如下步骤：A、筛选具有柿木屑分解优势的金顶侧耳株：A‑1、金顶侧耳种紫外诱变：A‑2、诱变株的初筛：以78%致死率的时间作为照射剂量诱变金顶侧耳原生质体，待原生质体在柿木屑分解优势菌株再生平皿已再生出菌落后，取优先再生出来、菌落直径最大、生长最旺盛的菌落进入复筛阶段；初筛培养基：柿木屑粉40g/L、麸皮10g/L、KH2PO41g/L、MgSO4·7H2O1g/L、pH值6.0、琼脂20g/L，麸皮煮沸30min，过滤去渣取浸提液，柿木屑粉碎过80目筛得粉状，直接加入培养基，常规灭菌；A‑3、诱变株的复筛：将初筛选出来的菌株每株接10支PDA斜面培养基至菌丝长满斜面，计算菌丝生长速率，从中选出长速快、长势好的菌株进入精筛；A‑4、诱变株的精筛：将复筛出来的菌株每株接入10支栽培料培养基试管上进行培养，栽培料培养基：柿木屑60%、啤酒糟20%、柿树叶10%、麸皮8%、生石灰2%，加入水或水溶液，料水比为1:1.4进行拌料，121℃下高压灭菌150min；取长速快、长势好的菌株;B、菌种扩繁B‑1、液体培养取栽培时所用相同的啤酒糟3%，加入去皮马铃薯12%、麸皮1%共煮沸30min，过滤去渣即得培养基浸煮液，再加入KH2PO41g/L、MgSO4·7H2O1g/L、pH值6.0、琼脂3g/L，柿木屑添加量为10%，粉碎过80目筛后直接加入培养基中，即得发酵培养液，培养液分装完毕后，瓶口包扎四层棉布，棉布外加盖两层报纸，进行高压灭菌，121℃、0.1‑0.15MPa灭菌30min；将灭过菌的液体培养基中放入接种箱中，表面紫外或甲醛熏蒸灭菌后进行接种，每瓶接精筛保存的PDA斜面菌种1cm2大小菌块四块，静置24h后放入转速为160r/min、温度为25℃恒温摇床培养96h，生物量达到25g/100mL以上，镜检合格后使用；B‑2、麦粒菌种扩种：培养基为麦粒79%、柿木屑20%、生石灰1%。将麦粒用自来水浸泡10h后，煮沸至麦粒掰开无白芯为止，滤去水分，摊开晾干，加入柿木屑、生石灰搅拌均匀，pH值自然，用500mL的细口瓶或双层聚丙烯塑料袋装至瓶/袋肩，0.10‑0.15MPa灭菌2.5h；避光培养至满瓶/袋后7‑15天即可在金顶侧耳栽培过程中应用；C、金顶侧耳栽培：取步骤A‑4的栽培料培养基，装入17cm×32cm×0.05cm聚乙烯塑料袋，每袋装干料300g，121°C高压灭菌150min，冷却后，按照5‑10%的接种量接入；20℃避光培养至满袋后，敞开袋口进行生殖生长管理阶段，此阶段保持温度15‑20℃，空气湿度85‑95%。