[发明专利]哺乳动物组织中多潜能干细胞的分离培养

摘要

本发明提供了哺乳动物组织中多潜能干细胞的分离培养，属于干细胞培养技术领域。在无菌下，组织机械分离方法分离、培养绵羊胎儿肾组织原代细胞，用培养液II 37培养48小时；待细胞克隆出现后洗涤，加入培养液III后培养18小时；离心收集的细胞用培养液II悬浮细胞，接种于培养皿中，出现细胞克隆；传3～4代后冻存备用。培养液I组分包括DMEM、L‑谷氨酰胺、非必需氨基酸、丙酮酸钠、微量β‑巯基乙醇、LIF、bFGF；培养液II组分包括培养液I、FBS；培养液III组分包括培养液I和胰蛋白酶。本发明能够从哺乳动物组织中分离得到多潜能干细胞。

主权项

1.一种从哺乳动物组织中分离培养多潜能干细胞的方法，其特征是：1)配液培养液I：DMEM+1％L‑谷氨酰胺+1％非必需氨基酸+1％丙酮酸钠+微量β‑巯基乙醇+500u/ml LIF+5ng/ml bFGF，用0.22μm的滤器过滤，4℃保存；培养液II：培养液I+15％FBS；培养液III：培养液I+0.01％胰蛋白酶，用0.22μm的滤器过滤，4℃保存；2)绵羊胎儿肾组织多潜能干细胞分离培养无菌条件下，采用组织机械分离方法分离、培养绵羊胎儿肾组织原代细胞，培养液II 37℃ 5％CO₂饱和湿度条件下培养48小时；待细胞克隆出现后用D‑PBS洗3遍，而后加入培养液III，37℃ 5％CO₂饱和湿度条件下培养18小时；1500r/min×5min离心收集细胞，用培养液II悬浮细胞，吹均，以10⁵细胞/皿接种于6cm培养皿中，72小时后出现细胞克隆；传3～4代后冻存备用。